中藥矮地茶質(zhì)量控制與體內(nèi)代謝及舒血寧注射液的多組分測定與藥動學(xué)研究.pdf

1、矮地茶為傳統(tǒng)中藥，來源于紫金?？浦参镒辖鹋５母稍锶辏蛰d于《中國藥典》第一部，具有化痰止咳，利濕，活血之功效?，F(xiàn)代臨床藥理研究表明矮地茶中的某些有效成分具有抗炎、抗病毒、抗菌、預(yù)防支氣管哮喘等作用。研究表明，矮地茶中含有兒茶素類、黃酮類、酚酸類、異香豆素類和揮發(fā)油類等成分。為了更好的使用這種藥物和增加臨床安全性，迫切需要建立一種同時分析測定矮地茶中有效成分的方法以對其進(jìn)行質(zhì)量控制。巖白菜素為矮地茶藥材中含量較高的活性成分之一，研究表明

2、，它具有抗炎、抗肝毒、免疫調(diào)節(jié)、抗?jié)儭⒖寡趸?、抗HIV和精神保護(hù)的作用等多種藥理作用。《中華人民共和國藥典》已將其收為鎮(zhèn)咳祛痰藥，主要用于慢性支氣管炎。為了更好地使用該藥物有必要對巖白菜素進(jìn)行體內(nèi)代謝研究。舒血寧注射液為銀杏葉提取制成的滅菌水溶液，主治擴(kuò)張血管，改善微循環(huán)，用于缺血性心腦血管疾病、冠心病、心絞痛、腦栓塞、腦血管痙攣等。其主要活性成分為內(nèi)酯類（銀杏內(nèi)酯A、B、C和白果內(nèi)酯），黃酮類化合物（以異鼠李素、槲皮素和山奈酚為苷元

3、的苷）。對銀杏內(nèi)酯和黃酮類成分進(jìn)行多組分測定及藥代動力學(xué)可以為舒血寧的藥理作用和臨床療效研究提供可靠依據(jù)。
　　 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)具有專屬性高、快速靈敏等優(yōu)點(diǎn)，是目前化學(xué)成分定性和定量分析的有力工具。本研究采用LC-MS技術(shù)建立矮地茶藥材中10種有效成分定量分析方法，為其質(zhì)量控制提供新的方法和手段;確認(rèn)大鼠口服巖白菜素的代謝產(chǎn)物，建立血漿、膽汁和尿液樣品中巖白菜素及其代謝物的LC-MS定量分析方法，探索其藥代

4、動力學(xué)參數(shù)和排泄動力學(xué)特征;建立HPLC-MS法同時測定舒血寧注射液中萜類內(nèi)酯和黃酮醇苷的含量;建立尾靜脈注射給予大鼠舒血寧注射液后，不同時間點(diǎn)的大鼠血漿中銀杏黃酮和內(nèi)酯的血藥濃度的定量分析方法，以闡明其藥代動力學(xué)特征。
　　 第一部分HPLC-MS法同時測定中藥矮地茶中10種有效成分
　　 目的:建立一種快速、準(zhǔn)確、可同時測定矮地茶中10種化學(xué)成分(3種兒茶素類、4種黃酮、2種酚酸和1種異香豆素類)的HPLC-ESI-

5、MS分析方法，并用于不同于產(chǎn)地矮地茶藥材的分析。
　　 方法:色譜條件:色譜柱:Diamonsil-C18(150mm×4.6mm，5μm,Dikma);流動相:甲醇-0.2‰甲酸水(v/v)。梯度洗脫;流速:0.8mL/min。質(zhì)譜條件:ESI源;負(fù)離子模式監(jiān)測;源噴射電壓(IS):-4500V;離子源溫度:500℃。霧化氣(Gas1):40psi，加熱氣(Gas2):50psi，簾氣:25psi。由MRM-IDA-EPI模式

6、對10種化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證，采用MRM掃描模式建立其含量測定方法，用所建立的方法對25批不同產(chǎn)地的矮地茶藥材進(jìn)行定量測定，采用聚類分析和主成分分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:10種化學(xué)成分的峰面積與濃度在測定濃度范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系，檢測限、定量限、精密度和穩(wěn)定性均符合要求。加樣回收率范圍為97.7％-103.6％，RSD為0.43％-3.32％。樣品測定結(jié)果表明，不同產(chǎn)地矮地茶有效成分的含量差異較大，采用聚類分析和主成分

7、分析等統(tǒng)計(jì)方法分析表明，矮地茶的道地藥材（來自于湖南、河北和廣東）與對照藥材趨于一致。
　　 結(jié)論:本法簡便、快速、靈敏度高、專屬性好，可用于矮地茶中沒食子酸、表兒茶素、巖白菜素、原兒茶酸、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯、楊梅苷、蘆丁、楊梅素、槲皮素的含量測定，可為矮地茶藥材質(zhì)量控制提供一個強(qiáng)有力的工具。
　　 第二部分HPLC-MS法測定大鼠血漿、膽汁和尿液中巖白菜素及其葡萄糖醛酸結(jié)合物的濃度
　　

8、 目的:建立一種LC-MS法測定大鼠血漿、膽汁和尿液中巖白菜素及其葡萄糖醛酸代謝物的方法。
　　 方法:血漿、膽汁和尿液三種生物樣品采用沉淀蛋白的處理方法，用酶水解法將巖白菜素的結(jié)合型代謝物轉(zhuǎn)化為其原形藥物進(jìn)行測定。HPLC-MS法采用ESI源，負(fù)離子MRM模式監(jiān)測。以磺胺甲嗯唑?yàn)閮?nèi)標(biāo)，C18（250×4.6mm，5μm）色譜柱，甲醇-0.5％甲酸水(v/v)為流動相。按照12mg/kg的劑量給SD大鼠灌胃巖白菜素的羧甲基纖維

9、素鈉混懸液，于給藥后5，30，60，90，100，120，150，180，240，360，480和720min取血，24h內(nèi)取膽汁樣品，48h內(nèi)收集尿液，分別測定巖白菜素及其葡萄糖醛酸結(jié)合物的濃度。
　　 結(jié)果:結(jié)果表明，巖白菜素在體內(nèi)迅速吸收并轉(zhuǎn)化為及其葡萄糖醛酸結(jié)合物，半衰期為0.36h。巖白菜素的排泄百分比為52.51％，其中膽汁占20.31％(24h)，尿液占32.20％(48h)。
　　 結(jié)論:建立了一種靈敏度

10、高、專屬性強(qiáng)的HPLC-MS法測定大鼠血漿、膽汁和尿液中巖白菜素及其葡萄糖醛酸代謝物的濃度。該方法操作簡便，分析時間短，可用于巖白菜素及其制劑的藥代動力學(xué)和排泄動力學(xué)研究。
　　 第三部分HPLC-MS法同時測定舒血寧注射液中萜類內(nèi)酯和黃酮醇苷的含量
　　 目的:建立HPLC-MS法同時測定舒血寧注射液中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、白果內(nèi)酯以及槲皮素、異鼠李素和山柰酚的含量。
　　 方法:采用DikmaD

11、iamonsilC18色譜柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱溫30℃，以乙腈-0.05％甲酸水(v/v)溶液為流動相進(jìn)行梯度洗脫，流速0.8mL/min，進(jìn)樣量10μL;采用電噴霧離子源進(jìn)行負(fù)離子模式監(jiān)測，多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)用于定量分析，源噴射電壓為-4500V，離子源溫度為650℃。銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、白果內(nèi)酯以及槲皮素、異鼠李素和山柰酚的檢測離子對分別為453.1/351.2，423.1/367.0，43

12、9.0/383.0,325.0/163.1,301.0/150.9,315.1/300.0和284.9/93.0。
　　 結(jié)果:在7min內(nèi)舒血寧注射液中萜類內(nèi)酯和黃酮類成分完全分離;峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系;加樣回收率為97.7％-101.5％，精密度RSD為0.57％-1.20％。
　　 結(jié)論:建立HPLC-MS法測定舒血寧注射液中7種成分的含量，方法具有良好的重復(fù)性、回收率和精密度，可用于舒血寧注射液的質(zhì)量控制

13、。
　　 第四部分HPLC-MS法同時測定大鼠血漿中萜類內(nèi)酯和黃酮成分及其藥動學(xué)研究
　　 目的:建立一種快速的液質(zhì)聯(lián)用法測定大鼠血漿中萜類內(nèi)酯（白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、B和C）和黃酮類成分（異鼠李素、槲皮素和山奈酚），并用于大鼠尾靜脈注射給予舒血寧注射液后的藥動學(xué)研究。
　　 方法:收集大鼠尾靜脈注射給予舒血寧注射液后的的血漿樣品，用液液萃取的方法進(jìn)行樣品分析。采用迪馬C18（150mm×4.6mmi.d.，5μ

14、m）柱，乙腈-0.05％甲酸水(v/v)作為流動相梯度洗脫，磺胺甲噁唑(SMZ)為內(nèi)標(biāo)，流速0.8mL/min，進(jìn)樣量10μL。采用電噴霧離子源(ESI)，負(fù)離子掃描，多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式進(jìn)行檢測。
　　 結(jié)果:該方法檢測限、定量限、精密度和準(zhǔn)確度均符合要求，血漿中內(nèi)酯類和黃酮類成分在測定濃度范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系。結(jié)果表明，7種成分的藥動學(xué)特征趨勢基本一致，但白果內(nèi)酯的消除速率常數(shù)為0.024，較其它6種成分（Ke在0