痰瘀同治法保護(hù)轉(zhuǎn)基因ApoE---小鼠糖尿病模型血管內(nèi)皮功能研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)使用具有痰瘀同治功效的丹瓜方治療轉(zhuǎn)基因ApoE-/-小鼠的糖尿病模型，檢測(cè)其糖脂代謝、胰島素功能、內(nèi)皮功能、相關(guān)指標(biāo)，并觀察冠脈血管形態(tài)，探討痰瘀同治法基于血管內(nèi)皮功能保護(hù)糖尿病血管病變的機(jī)制，為進(jìn)一步防治糖尿病血管并發(fā)癥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.糖尿病模型的建立
　　選擇自發(fā)性高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化的轉(zhuǎn)基因ApoE-/-小鼠，以鏈脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型，以非同日兩次空腹血糖(

2、FBG)≥11.1mmol/l為糖尿病成模標(biāo)準(zhǔn)。
　　2.分組
　　將成模鼠按體重分層，再按血糖由低到高根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為模型組、丹瓜方組、聯(lián)合組、吡格列酮組，每組8只。
　　選血糖正常的8只同齡同品系C57小鼠作為對(duì)照組。
　　3.處理方法
　　灌胃干預(yù)12周。監(jiān)測(cè)FBG、體重、攝食量、飲水量、皮溫，測(cè)定血清糖化血紅蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TC)、低密度脂蛋白(LDL-c)，放射免疫法測(cè)定血清空

3、腹胰島素(FIns)、空腹C肽(CP)、內(nèi)皮素-1（ET-1），生化法-硝酸還原酶法測(cè)定血清一氧化氮(NO)，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法測(cè)定腎組織勻漿血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)檢測(cè)腎組織VCAM-1-mRNA、MCP-1-mRNA表達(dá)，顯微鏡觀察冠脈血管形態(tài)。
　　4.對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：
　　1.小鼠飲水量、攝食量監(jiān)測(cè)顯示

4、:干預(yù)后組間攝食量差異顯著(P=0.000)，各組ApoE-/-鼠都顯著少于C57，吡格列酮組攝食量少于模型組和丹瓜方組(P＜0.01)。干預(yù)后組間飲水量差異顯著，模型、聯(lián)合、丹瓜方組均較C57組多（P＜0.01或P＜0.05），吡格列酮組則明顯少于丹瓜方組(P＜0.05)
　　2.小鼠體重監(jiān)測(cè)顯示:C57體重持續(xù)超過(guò)造模各組(P＜0.01或P＜0.05)，丹瓜方組體重及增量均輕于吡格列酮組（P＜0.05或P＜0.01）。

5、　　3.小鼠皮溫檢測(cè)顯示:模型組明顯高于C57組(P＜0.05)，丹瓜方組、聯(lián)合組與吡格列酮組均顯著高于C57組(P＜0.01)且丹瓜方組顯著高于模型組(P＜0.01)。
　　4.小鼠血清檢測(cè)血糖、HbA1C顯示:血糖值組間差異顯著(P=0.001)，丹瓜方組和聯(lián)合組均與C57組沒(méi)有顯著差異，但都顯著低于模型組(P＜0.01);HbA1C水平模型組顯著高于C57組(P＜0.01)，各治療組ApoE-/-小鼠之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異且都顯

6、著低于模型組(P＜0.01)。
　　5.小鼠血清檢測(cè)TC、LDL-c顯示:各組ApoE-/-小鼠與C57比較，TC、LDL-c水平均顯著升高;但僅丹瓜方組TC、LDL-c水平有明顯降低(P＜0.05)，并且吡格列酮組TC明顯高于丹瓜方組(P＜0.05)，LDL-c水平與丹瓜方組差異更大(P＜0.01)。
　　6.小鼠血清檢測(cè)Flns、CP、FIRI顯示:Flns、CP、FIRI水平模型組提高(P＜0.05或P＜0.01)，F(xiàn)

7、lns、FIRI、CP其余各組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　7.小鼠血清檢測(cè)NO、ET-1顯示:NO水平組間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.517)。ET-1模型組顯著高于C57組(P＜0.01)，藥物干預(yù)三組均顯著低于模型組(P＜0.01)。
　　8.酶聯(lián)免疫測(cè)定腎組織勻漿VCAM-1、MCP-1顯示:VCAM-1、MCP-1水平丹瓜方組水平顯著低于模型組;MCP-1水平吡格列酮組顯著高于丹瓜方組(P＜0.01)

8、。
　　9.實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定腎組織VCAM-1-mRNA、MCP-1-mRNA顯示:VCAM-1-mRNA、MCP-1-mRNA相對(duì)含量丹瓜方組顯著低于模型組(P＜0.01)，吡格列酮組明顯高于丹瓜方(P＜0.05)。
　　10.冠狀動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)改變:模型組血管內(nèi)膜明顯增厚，內(nèi)皮細(xì)胞腫脹變性，甚至缺失，纖維隆起，內(nèi)膜含泡沫細(xì)胞;丹瓜方組內(nèi)皮細(xì)胞部分腫脹變性，內(nèi)膜未見(jiàn)泡沫細(xì)胞;內(nèi)彈力膜尚清。
　　結(jié)論：