恬心湯對大鼠缺血再灌注時心肌細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及對Bcl-2、Bax表達(dá)影響的實驗研究.pdf

1、近年來，研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡是心肌缺血再灌注損傷中心肌細(xì)胞死亡的機(jī)制之一。在心血管疾病治療過程中，許多常用和新發(fā)展的治療措施都不可避免地造成缺血再灌注損傷(IRI)，因此缺血再灌注時的心肌保護(hù)越來越成為心血管領(lǐng)域的研究熱點。本實驗采用血清學(xué)方法、病理學(xué)方法、免疫組織化學(xué)法等研究方法來觀察恬心湯(TXT)對心肌缺血后再灌注損傷大鼠心肌酶、氧化應(yīng)激因子、細(xì)胞凋亡調(diào)控基因的蛋白表達(dá)及心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)學(xué)等的改變，多層次、多角度探討TXT防治缺血再灌注損

2、傷的作用機(jī)制，為該藥的臨床應(yīng)用提供可靠的實驗依據(jù)，為冠心病患者中醫(yī)中藥的臨床復(fù)方用藥治療和預(yù)防提供新的思路和方法。 目的：探討恬心湯對實驗性心肌缺血再灌注大鼠心肌細(xì)胞凋亡的保護(hù)機(jī)制。 方法：實驗前記錄肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖，檢測正常者可入選，將入選的50只SD雄性大鼠隨機(jī)分為空白對照組，模型對照組，藥物對照組及恬心湯大劑量治療組(TXT max)和恬心湯小劑量治療組(TXT min)，每組10只。各治療組分別開始灌胃用藥，空白

3、組和模型組每次給予10ml/kg生理鹽水，藥物對照組給予硝酸異山梨酯2.5mg/kg，用生理鹽水配成等體積混懸液，TXT max組和TXT min組分別給予含生藥46.6g/kg，23.3g/kg湯劑，以上液體按10ml/kg灌胃，每日一次，連續(xù)7天，正常飲食。第8天除空白組外，其余4組大鼠均舌下靜脈注射腦垂體后葉素(Pit)1U/kg，30min尾靜脈注射硝酸甘油(NG)1mg/kg復(fù)制心肌缺血再灌注模型，空白組舌下靜脈注射等量生理鹽

4、水。各組均在舌下靜脈注射Pit后30min時用20％烏拉坦5ml/kg腹腔注射麻醉，用心電圖機(jī)標(biāo)記II導(dǎo)聯(lián)。80min后斷頭取血，用全自動生化分析儀檢測血清心肌酶，即肌酸激酶(CK)，乳酸脫氫酶(LDH)。血清超氧化物歧化酶(SOD)，丙二醛(MDA)，SOD采用黃嘌呤氧化酶法測定，MDA采用TAB縮合比舌法測定。取心尖部心肌組織，進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色，光鏡下觀察病理形態(tài)學(xué)改變。并采用免疫組化SP法檢測B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(

5、Bcl-2)和Bax表達(dá)。 結(jié)果： 1.心電圖改變與實驗前所做心電圖相比，空白組心電圖ST段接近等電位線，T波無明顯降低。與空白組比較，模型組ST段壓低及T波降低明顯，表明本次復(fù)制心肌缺血再灌注模型成功。與模型組比較，藥物對照組和中藥治療組ST段及T波壓低較小，其中中藥治療組較藥物對照組ST段及T波壓低改善更為顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。但中藥治療組組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 2.血清心肌酶CK、LDH三項指標(biāo)中，模型組較空

6、白組均顯著升高，有統(tǒng)計學(xué)意義，與模型組比較，藥物對照組和中藥治療組三項指標(biāo)均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但藥物對照組和TXT大小劑量組三組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 3.血清SOD、MDA模型組與空白組相比，MDA水平升高。與模型組比較，藥物對照組及兩個中藥治療組較模型組水平明顯降低，但藥物對照組及中藥治療組組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。模型組與空白組相比，SOD水平降低。與模型組比較，藥物對照組及兩個中藥治療組較模型組水平明顯升高，但藥物對照

7、組及中藥治療組組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。 4.組織病理損傷空白對照組未見明顯的組織學(xué)改變；模型組以心肌大范細(xì)胞變圓或不規(guī)則，與周圍組織脫離，細(xì)胞皺縮，核染色質(zhì)密度增加，并呈顆粒狀凝聚于核膜周圍；藥物對照組和TXTmin組較模型組改變輕微，以細(xì)胞變圓皺縮為主；TXTmax組的病理改變最輕，僅有少量細(xì)胞皺縮。 5.Bcl-2和Bax表達(dá)與空白組比較，模型組大鼠Bax表達(dá)均明顯升高，差異顯著，Bcl-2表達(dá)均明顯降低，差異顯著。

8、與模型組比較，各治療組Bax表達(dá)都有不同程度的降低，其中大劑量組降低最多，藥物對照組和小劑量組降低較少，但均有統(tǒng)計學(xué)意義。藥物對照組和小劑量組組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與模型組比較，各治療組Bcl-2表達(dá)都有不同程度的升高，其中大劑量組差異最大，藥物對照組和小劑量組差異較小，但均有統(tǒng)計學(xué)意義。藥物對照組和小劑量組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：恬心湯對大鼠心肌短暫缺血再灌注而引起的心肌損傷具有保護(hù)作用，并能改善心肌供血，通過調(diào)節(jié)缺血心肌