血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-磺化殼聚糖多層膜改性鈦表面的研究.pdf

1、第一部分鈦表面血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/磺化殼聚糖多層膜的構(gòu)建
　　目的:構(gòu)建鈦—血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/磺化殼聚糖（VEGF/SCS）多層膜，并檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)，為進(jìn)一步的血液相容性及細(xì)胞相容性檢測(cè)奠定基礎(chǔ)。
　　方法:①以殼聚糖為原料，采用化學(xué)合成法制備磺化殼聚糖（sulfated chitosan，SCS）并對(duì)其表征，其檢測(cè)指標(biāo)有：紅外光譜檢測(cè)分析、含硫量檢測(cè)；②對(duì)鈦金屬進(jìn)行預(yù)處理，并在其表面層層自組裝構(gòu)建VEGF/SCS多層膜；對(duì)鈦金

2、屬表面涂層進(jìn)行表征分析，檢測(cè)指標(biāo)有：接觸角測(cè)量、表面形貌觀察、表面VEGF含量檢測(cè)。
　　結(jié)果:①經(jīng)化學(xué)合成后，殼聚糖分子鏈上成功添加上具有抗凝血活性的硫酸酯結(jié)構(gòu)，其含硫量經(jīng)檢測(cè)為6.7％；②預(yù)處理的鈦金屬表面經(jīng)層層自組裝血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/磺化殼聚糖（VEGF/SCS）多層膜后，其水接觸角下降(43.16±1.55°)，親水性增加；預(yù)處理的鈦金屬表面疏松多孔，經(jīng)自組裝多層膜改性后，表面更加光整，結(jié)構(gòu)較為均一；ELISA Kit檢測(cè)

3、剩余VEGF165溶液及已收集清洗液中VEGF165含量，以配置的VEGF165總量相減，檢測(cè)結(jié)果顯示涂層改性的鈦表面VEGF密度為29±2.7ng/cm2。
　　結(jié)論:成功合成了帶有磺酸酯結(jié)構(gòu)的磺化殼聚糖，并且在鈦金屬表面層層自組裝構(gòu)建了血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/磺化殼聚糖多層膜結(jié)構(gòu)，為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。
　　第二部分鈦表面血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/磺化殼聚糖多層膜的體外血液相容性及細(xì)胞相容性檢測(cè)
　　目的:評(píng)價(jià)鈦表面血管內(nèi)皮生

4、長(zhǎng)因子/磺化殼聚糖多層膜的體外血液相容性及細(xì)胞相容性。
　　方法:①將試件置于采集的健康人全血中孵育，進(jìn)行體外溶血試驗(yàn)，測(cè)定凝血酶原時(shí)間（PT）、活化部分凝血酶原時(shí)間（APTT）；另取健康人全血離心，將得到的富血小板血漿(PRP)與試件接觸，進(jìn)行血小板粘附試驗(yàn)；②將鈦試件置于生長(zhǎng)期的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)板中，進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、NO分泌檢測(cè)、表面形貌觀察。
　　結(jié)果:①鈦表面血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/磺化殼聚糖多層膜體外溶血率為0.567%，

5、與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；②涂覆有VEGF/SCS多層膜的Ti試件可延長(zhǎng)APTT（49.29±1.05）s，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），對(duì)PT未見(jiàn)明顯影響；③掃描電鏡下示血小板粘附試驗(yàn)中，涂覆有VEGF/SCS多層膜的Ti試件表面血小板粘附數(shù)量較對(duì)照組明顯減少。④細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)表明，多層膜結(jié)構(gòu)的鈦金屬表面的細(xì)胞相對(duì)增殖能力強(qiáng)于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；⑤多層膜結(jié)構(gòu)的鈦金屬組NO分泌量增加

6、，與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；⑥掃描電鏡下可見(jiàn)多層膜結(jié)構(gòu)的鈦金屬組表面內(nèi)皮細(xì)胞鋪展數(shù)量多于對(duì)照組。
　　結(jié)論:血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/磺化殼聚糖多層膜改性的鈦金屬試件具有良好的血液相容性，也具有較好的細(xì)胞相容性。
　　第三部分鈦表面血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/磺化殼聚糖多層膜的體內(nèi)血液相容性檢測(cè)
　　目的:評(píng)價(jià)鈦表面血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/磺化殼聚糖多層膜的體內(nèi)血液相容性
　　方法:將15只新西蘭大白兔隨機(jī)分為三組，分別

7、為：裸鈦金屬組、鈦-血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/磺化殼聚糖多層膜組、正常血管組，每組五只，建立兔頸動(dòng)脈腔內(nèi)植入模型；于1周后取出植入樣品及植入段血管組織，肉眼觀察樣品表面和血管內(nèi)壁血栓形成情況，HE染色切片鏡下觀察血管組織。
　　結(jié)果:鈦-血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/磺化殼聚糖多層膜組與裸鈦金屬組相比，植入試件段血管腔內(nèi)未見(jiàn)明顯的血栓和纖維組織，血管內(nèi)表面較為光整，與正常血管內(nèi)表面相似；鈦-血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/磺化殼聚糖多層膜試件表面未見(jiàn)明顯血栓形成。