聯(lián)檢食品中五種常見沙門氏菌血清型的膠體金免疫層析方法的研究.pdf

1、沙門氏菌(Salmonella spp.)是一種能引起人畜共患病的食源性致病菌。該菌可通過食物、飼料、動物糞便和人等進(jìn)行傳播。在世界各地的食物中毒事件中由沙門氏菌引起的中毒病例占第一位。沙門氏菌常引起人類急性腹瀉、嘔吐、腹部疼痛、高燒和敗血癥等疾病。因此,快速準(zhǔn)確地檢測沙門氏菌具有重要意義。傳統(tǒng)的沙門氏菌檢測技術(shù)需4~7天,費時耗力。目前,針對沙門氏菌的快速檢測方法多種多樣,例如多重 PCR、生物芯片、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)等。但這些技術(shù)往往

2、需要用到昂貴的儀器或復(fù)雜的實驗操作,不利于向基層推廣。針對以上問題,本文以膠體金為示蹤標(biāo)記物,對聯(lián)檢五種常見沙門氏菌血清型的免疫層析方法進(jìn)行研究。
　　本文以鴨沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌為檢測目標(biāo)菌將抗沙門氏菌的27株單抗相互配對,篩選出針對鴨沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌的配對抗體:8H10-B3和5G6-D7及針對豬霍亂沙門氏菌的配對抗體:11D8-D

3、4和9G6-A4。四株單抗的效價分別為1:640000、1:2560000、1:2560000和1:1280000。以單抗8H10-B3和11D8-D4分別標(biāo)記膠體金,單抗5G6-D7和9G6-A4混合抗體以及驢抗鼠IgG噴涂于硝酸纖維素膜上分別作為檢測線(T線)和質(zhì)控線(C線),初步建立了聯(lián)檢五種沙門氏菌血清型的免疫層析試紙條的快速檢測方法。沙門氏菌膠體金試紙條最佳實驗條件如下:單抗8H10-B3和11D8-D4的最佳標(biāo)記量為15μg

4、/mL和5μg/mL,5％的酪蛋白能有效地封閉金顆粒上的剩余位點;NC膜上T線混合抗體濃度(5G6-D7+9G6-A4)為(1.5+2.0) mg/mL,質(zhì)控線驢抗鼠二抗?jié)舛葹?mg/mL;單抗8H10-B3和11D8-D4的單次金標(biāo)抗體用量均為2μL。金標(biāo)抗體與菌的最佳體外孵育時間為5 min,試紙條的檢測時間為15 min。在最佳實驗條件下,沙門氏菌的最低檢測靈敏度為:鴨沙門和鼠傷寒沙門氏菌為1×106CFU/mL,豬霍亂、腸炎和甲