阿爾茨海默病細胞損傷的相關(guān)機制及加蘭他敏的神經(jīng)保護作用研究.pdf

1、阿爾茨海默病( Alzheimer's disease， AD)是一種進行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。其主要病理變化是腦內(nèi)膽堿能神經(jīng)元大量丟失和死亡。研究表明在AD病人腦組織中有大量β淀粉樣蛋白(Aβ)沉積。作為細胞存活和功能的重要細胞器，以往研究已經(jīng)證實線粒體的形態(tài)、運動和功能在AD時會受到影響，但關(guān)于其運動的長時程連續(xù)動態(tài)研究尚未見報道。另外，研究也表明AD病人腦內(nèi)存在膽堿能系統(tǒng)功能異常，而囊泡乙酰膽堿轉(zhuǎn)運體(vesicular ac

2、etylcholine transporter，VAChT)是膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的重要組成部分，已有文獻通過免疫組化和放射免疫方法證實AD病人腦內(nèi)VAChT表達降低，但關(guān)于該囊泡的細胞內(nèi)運動過程及在疾病中的作用的研究較少，且研究手段較單一。根據(jù)AD的相關(guān)病理變化和發(fā)病機制，目前臨床上主要采用膽堿酯酶抑制劑治療AD，加蘭他敏就是其中的一種。關(guān)于其作用機制，已有研究證實它能夠抑制Aβ聚集、氧化應(yīng)激和神經(jīng)元凋亡等。但是，加蘭他敏具體的神經(jīng)保護機制

3、還沒有完全清楚，有待進一步探討。
　　 本論文首先用Aβ蛋白活性片段Aβ25-35誘導高分化PC12細胞凋亡建立AD體外細胞模型，確定20μMAβ25-35作用24h為造模的最佳條件。然后在該模型基礎(chǔ)上，利用激光共聚焦顯微技術(shù)、流式細胞術(shù)、熒光酶標儀、活細胞工作站、全內(nèi)反射熒光顯微鏡(TIRFM)、熒光染料染色、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、分子生物學技術(shù)和計算機圖像處理等，對Aβ25-35誘導PC12細胞線粒體運動和功能變化、VAChT運動和蛋白

4、表達變化及加蘭他敏的神經(jīng)保護機制進行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：(1)Aβ25-35可以誘導PC12細胞線粒體形態(tài)運動和功能異常，在Aβ25-35作用早期，線粒體動力學改變是可逆的，依賴于暴露的時間和藥物濃度；(2)正常情況下PC12細胞中單個囊泡在膜融合之前的轉(zhuǎn)運，發(fā)現(xiàn)VAChT囊泡的運動主要有3種類型，分別為單個囊泡沿一條軌跡長距離運動、多個囊泡沿同一條軌跡運動和單個囊泡沿一條軌跡的雙向往返運動，且以第1種運動類型最為常見。在此基礎(chǔ)上進一步研

5、究了Aβ25.35對VAChT運動的影響，發(fā)現(xiàn)20μMAβ25-35作用24h能明顯抑制VAChT運動。同時檢測到Aβ25-35能顯著抑制VAChT蛋白的表達；(3)加蘭他敏能抑制Aβ25-35聚集、Aβ25-35誘導的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣釋放、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GADD153和Grp78/94表達上升和下游的caspase-12活化增加。另外加蘭他敏也能抑制Aβ25-35誘導的線粒體膜電位崩解、ROS產(chǎn)生、細胞色素c釋放、Bcl-2/Bax比值下