創(chuàng)面壞死組織分解物對家兔血清TNF-a、IL-1、IL-6含量的影響.pdf

1、嚴(yán)重感染是燒傷患者死亡的重要原因。燒傷后炎癥介質(zhì)的大量釋放、創(chuàng)面細菌的入侵、局部組織毒素的吸收等因素可誘導(dǎo)機體SIRS甚至MODS的發(fā)生,其中,燒傷創(chuàng)面被認為是燒傷患者的主要致炎因素。機體受到創(chuàng)傷時,局部創(chuàng)面壞死組織,不但是感染發(fā)生的溫床,其形成的“組織毒素”還可以誘發(fā)諸多的病理生理變化。在臨床中,無論是急性創(chuàng)面患者還是慢性創(chuàng)面患者,傷口局部或多或少地都會存在壞死組織分解產(chǎn)物,當(dāng)創(chuàng)面較廣泛且伴有感染時,如在大面積深度燒傷、嚴(yán)重電擊傷或嚴(yán)

2、重糖尿病足、慢性創(chuàng)面伴有大量濕性壞死的患者中,這種創(chuàng)面壞死組織分解產(chǎn)物的量更為尤甚。人們觀察到這些嚴(yán)重病人往往出現(xiàn)炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS),更有甚者出現(xiàn)DIC、MODS,這提示外部有對機體有毒的物質(zhì)由創(chuàng)面吸收入血,從而誘導(dǎo)了SIRS的發(fā)生。以上的現(xiàn)象給予我們提示:當(dāng)創(chuàng)面存在大量的、充滿異味的壞死組織時,其分解產(chǎn)物被吸收入血后,往往對機體產(chǎn)生一定的損害,嚴(yán)重時可危及生命。對于這些毒性物質(zhì),稱之為“組織毒素”,至于它的構(gòu)成至今眾說不一,有

3、云是“脂蛋白復(fù)合物(LPC)”,也有稱是“脂質(zhì)過氧化物(LPO)”的,甚至還有稱是中分子物質(zhì)、變性蛋白等。不管怎樣,這些創(chuàng)面壞死組織分解物質(zhì)總是和內(nèi)毒素混雜在一起?，F(xiàn)在已確認革蘭陰性桿菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素是引發(fā)機體全身炎癥反應(yīng)的元兇,防治革蘭陰性桿菌以抑制膿毒癥的發(fā)生已成為臨床的共識,但不知壞死組織分解物本身能否導(dǎo)致全身性炎癥反應(yīng)?如果能,它與內(nèi)毒素有何關(guān)系?兩者對機體炎癥系統(tǒng)的影響有何異同?
　　第一部分探討創(chuàng)面壞死組織分解物是否對機

4、體炎癥因子產(chǎn)生明顯影響
　　研究目的：
　　研究通過分別建立兩種毒性物質(zhì)經(jīng)家兔腹腔吸收模型,動態(tài)檢測血液炎癥因子的濃度變化,對比分析壞死組織分解物與內(nèi)毒素兩種毒性物質(zhì)對機體炎癥因子影響的異同,探討分析壞死組織分解物對機體炎癥因子的影響特點。
　　實驗步驟與方法：
　　成年新西蘭兔30只,體重2.2±0.3Kg,按隨機數(shù)字表法將實驗兔分成鹽水組、勻漿液組、內(nèi)毒素組,每組各10只,實驗開始前實驗兔預(yù)先飼養(yǎng)1周。實驗開

5、始時分別于各組實驗兔耳中央動脈抽取2ml血液標(biāo)本,然后分別往生理鹽水組實驗兔腹腔注射生理鹽水1ml/kg,勻漿液組腹腔注射無菌勻漿液1ml/kg,內(nèi)毒素組腹腔注射內(nèi)毒素40EU/ml/kg,腹腔注射后,分別于2h、6h、12h、24h、30h、36h、48h、60h于實驗兔耳中央動脈抽取2ml血液標(biāo)本,常溫靜置2h后,2000r/min離心10min,取上清液,標(biāo)本置于-70低溫冰箱凍存待檢。血清標(biāo)本按照ELISA試劑盒的要求進行處理,

6、采用雙抗體夾心法檢測血清中腫瘤壞死因子-α、白介素-1、白介素-6的濃度。數(shù)據(jù)以x±s表示,采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件重復(fù)測量數(shù)據(jù)方差分析對三組炎癥因子結(jié)果進行統(tǒng)計分析,兩兩比較用SNK法,根據(jù)炎癥因子含量的變化曲線采取Cubic模型曲線擬合,繪制對比圖形,進行spearman相關(guān)分析。
　　實驗結(jié)果：
　　1、壞死組織勻漿液組腹腔注射后很快可見血清TNF-α、IL-1、IL-6含量升高,12h以后達到高峰期,其峰值分別

7、為TNF-a(302.38±69.04)pg/ml、IL-1(502.28±42.11)pg/ml、IL-6(231.25±22.08)pg/ml,36h后開始出現(xiàn)回落。生理鹽水組炎癥因子濃度在觀察期間無明顯變化,兩組(勻漿液vs鹽水)各項指標(biāo)均呈非常明顯差異[TNF-a(181.20±23.55)pg/mlvs(78.13±8.25)pg/ml,p<0.01;IL-1(322.71±56.48)pg/mlvs(213.75±6.57)

8、pg/ml,p<0.01、IL-6(204.41±15.93)pg/mlvs(137.64±4.92)pg/ml,p<0.01];
　　2、壞死組織勻漿液組中炎癥因子的上升時間早于內(nèi)毒素組(2-4hvs5-6h),并且部分炎癥因子在峰值期間(30h)較內(nèi)毒素組明顯增高[IL-1(502.28±42.11)pg/mlvs(387.89±23.20)pg/ml,p<0.05;IL-6(231.25±22.08)pg/mlvs(161.

9、13±20.24)pg/ml,p<0.05];
　　3、曲線擬合中勻漿液組中炎癥因子濃度變化曲線明顯有別于內(nèi)毒素組。
　　小結(jié)：
　　創(chuàng)面壞死組織分解物可以誘導(dǎo)機體炎癥介質(zhì)的升高,其誘發(fā)機體炎癥因子反應(yīng)過程有別于單純內(nèi)毒素,其可能含有某些不同于、甚至強于單純內(nèi)毒素毒性的、能引起機體炎癥反應(yīng)的有害物質(zhì)。
　　在第一部分實驗中,我們發(fā)現(xiàn)創(chuàng)面壞死組織分解物可誘導(dǎo)機體炎癥因子不同程度的升高,并且其誘發(fā)炎癥因子的反應(yīng)過程有

10、別于內(nèi)毒素,提示壞死組織分解物中可能含有某些不同于、甚至強于單純內(nèi)毒素毒性的、能引起機體炎癥反應(yīng)的有害物質(zhì)。由于壞死組織分解物中含有的成分較多,具有生物活性的物質(zhì)以多胺為主,特別是腐胺與尸胺,因此,為進一步深入探討壞死組織分解物中何種物質(zhì)能夠引起如此強烈的炎癥因子反應(yīng),揭示壞死組織分解物中主要損害物質(zhì),本文設(shè)計并進行了更進一步的實驗研究。
　　第二部分探討創(chuàng)面壞死組織分解產(chǎn)物中誘導(dǎo)血清炎癥因子的主要損害物
　　研究目的：

11、r>　　研究通過分別建立三種毒性物質(zhì)經(jīng)家兔腹腔吸收模型,動態(tài)檢測血液中炎癥因子的濃度變化,對比分析壞死組織分解產(chǎn)物中對機體炎癥因子影響起主導(dǎo)作用的物質(zhì),理清局部壞死與全身損害的關(guān)系,為臨床開展積極有效的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。
　　實驗步驟與方法：
　　成年新西蘭兔40只,體重2.2±0.3Kg,按隨機數(shù)字表法將實驗兔分成鹽水組、勻漿液組、腐胺組、尸胺組,每組各10只,實驗開始前實驗兔預(yù)先飼養(yǎng)1周。實驗開始時分別于各組實驗兔

12、耳中央動脈抽取2ml血液標(biāo)本,然后分別往生理鹽水組實驗兔腹腔注射生理鹽水1ml/kg,勻漿液組腹腔注射無菌勻漿液1ml/kg,腐胺組腹腔注射1％腐胺1ml/kg,尸胺組腹腔注射1%尸胺1ml/kg,腹腔注射后,分別于2h、6h、12h、24h、30h、36h、48h、60h經(jīng)實驗兔耳中央動脈抽取2ml血液標(biāo)本,常溫靜置2h后,2000r/min離心10min,取上清液,標(biāo)本置于-70℃低溫冰箱凍存待檢。血清標(biāo)本按照ELISA試劑盒的要求

13、進行處理,采用雙抗體夾心法檢測血清標(biāo)本中腫瘤壞死因子-α、白介素-1、白介素-6的濃度。數(shù)據(jù)以x±s表示,采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件重復(fù)測量數(shù)據(jù)方差分析對三組炎癥因子結(jié)果進行統(tǒng)計分析,兩兩比較用SNK法,根據(jù)炎癥因子含量的變化曲線采取Cubic模型曲線擬合,繪制對比圖形,進行spearman相關(guān)分析。
　　實驗結(jié)果：
　　1、腐胺組及尸胺組經(jīng)腹腔注射后很快可見血清中炎癥因子TNF-α、IL-1、IL-6含量不同程度的升高

14、,與鹽水組呈顯著性差異[腐胺組TNF-α(236.34±28.53)pg/mlvs鹽水組(78.13±8.25)pg/ml,F25.20,p<0.01];[尸胺組TNF-α(423.12±115.74)pg/mlvs鹽水組(78.13±8.25)pg/ml,F25.20,p<0.01];
　　2、腐胺組中血清炎癥因子開始上升的時間與壞死組織勻漿液組較為接近(3-4hvs3-5h),比尸胺組較為延遲(3-4hvs2h),峰值比低于尸

15、胺組[TNF-α(338.60±35.61)pg/mlvs(475.87±85.72)pg/ml,F5.11,p<0.01;IL-1(518.10±44.24)pg/mlvs(539.44±22.59)pg/ml,F1.90,p<0.05;IL-6(265.89±33.54)pg/mlvs(309.40±27.14)pg/ml,F5.56,p<0.01],并且炎癥因子到達峰值時間晚于尸胺組(12-15hvs8-12h),峰值持續(xù)時間也短

16、于尸胺組(12-36hvs8-36h);
　　3、曲線擬合顯示腐胺組中炎癥因子濃度變化曲線有別于尸胺組卻近似于勻漿液組,統(tǒng)計學(xué)顯示腐胺與勻漿液相關(guān)性更為顯著(p<0.01)。
　　小結(jié)：
　　創(chuàng)面壞死組織分解物、腐胺、尸胺均可以誘導(dǎo)機體炎癥介質(zhì)的升高,其中同等劑量下的尸胺對機體炎癥因子激發(fā)的效應(yīng)最強,腐胺次之,壞死組織勻漿液最弱;腐胺誘導(dǎo)機體炎癥反應(yīng)的曲線趨勢與壞死組織勻漿液較為接近,在壞死組織分解產(chǎn)物誘導(dǎo)機體炎癥介質(zhì)

17、的升高過程中可能占居著主導(dǎo)作用。
　　結(jié)論：
　　一、創(chuàng)面壞死組織分解物可誘導(dǎo)機體炎癥因子的釋放。
　　二、創(chuàng)面壞死組織分解物誘發(fā)機體炎癥因子反應(yīng)過程有別于單純內(nèi)毒素,其含有不同于、甚至強于單純內(nèi)毒素毒性的、能引起機體炎癥反應(yīng)的有害物質(zhì)。
　　三、外源性腐胺和尸胺都可引起機體炎癥反應(yīng),其中腐胺誘導(dǎo)機體炎癥反應(yīng)與壞死組織勻漿液趨勢較為接近,在壞死組織分解產(chǎn)物誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中可能起著更重要的作用。
　　四、既往