擴張應力作用下皮膚組織學變化規(guī)律的研究.pdf

1、皮膚軟組織擴張術因其在組織修復與重建方面的臨床應用范圍廣,早已成為整形外科最為常用的治療手段之一,但也存在治療周期較長、擴張后的皮膚質地改變、回縮率高等缺點。如何在較短的治療周期內擴張獲得面積大并且質地好的皮膚就成了基礎研究努力的方向。本論文的第一部分介紹應用自行改良設計擴張器構建大鼠皮膚軟組織擴張模型的實驗方法,并結合HE染色和PCNA免疫組織化學染色結果證明其擴張效果。希望能為研究擴張皮膚的新生機制提供一個良好、成熟、穩(wěn)定的皮膚軟組

2、織擴張動物模型。本論文的第二部分介紹不同擴張時期皮膚膠原纖維變化的規(guī)律,通過Masson染色和天狼星紅染色,觀察皮膚中的膠原纖維在不同擴張階段的變化趨勢和規(guī)律,探索擴張后皮膚回縮率高及部分患者擴張后皮膚有類似“妊娠紋”樣外觀的原因所在;為后續(xù)研究如何通過改變擴張方式或添加人工干預因素調控膠原類型變化、降低擴張后皮膚的回縮率提供一個研究基礎。本論文的第三部分介紹真皮干細胞在擴張皮膚新生中作用的實驗假設與初步探索,探索擴張皮膚組織中真皮部分

3、的新生機制,為研究如何促進擴張皮膚新生奠定一定的實驗基礎。
　　第一部分應用自行改良設計擴張器構建大鼠皮膚軟組織擴張模型
　　目的:采用自行改良設計的短注射導管枕形擴張器構建大鼠皮膚軟組織擴張模型,并探討擴張模型產生的擴張應力對皮膚細胞增殖的影響,證明其擴張效果,為皮膚軟組織擴張的基礎研究提供一個良好、穩(wěn)定的動物模型。
　　方法:將SD大鼠按每組30只,隨機分為A、B兩組;A組應用自行改良設計的枕形擴張器,B組應用威寧

4、公司生產的常規(guī)擴張器,在大鼠頸部做切口、埋置擴張器,注射壺外置,構建皮膚擴張模型。分別在擴張后第1、2、3、4、5周采集A組大鼠擴張中心部位的皮膚和正常未擴張的皮膚作為組織標本。HE染色、鏡下觀察不同擴張時期皮膚組織結構在擴張應力刺激下發(fā)生了哪些改變;依據(jù)增殖細胞為 PCNA+細胞,進行免疫組化染色觀察擴張應力刺激對皮膚細胞增殖產生的影響。
　　結果: A組應用改良擴張器構建的擴張模型中,外置的注射壺術后不易被鼠咬掉,且擴張囊注水

5、及術后護理更為簡便,模型構建的穩(wěn)定性明顯高于B組。HE染色觀察:擴張應力作用下,皮膚表皮層變厚、真皮層變薄;PCNA免疫組化染色結果發(fā)現(xiàn):增殖細胞(PCNA+細胞)呈點狀散在分布于表皮的基底層及毛囊鞘周圍,PCNA+細胞數(shù)目在擴張后的第3周達到最高峰。
　　結論:自行改良設計的擴張器,是一種更適用于構建大鼠擴張動物模型的實驗材料;其產生了有效的擴張應力刺激,對大鼠的皮膚組織結構及皮膚細胞的增殖產生了影響。
　　第二部分不同擴

6、張時期皮膚膠原纖維變化規(guī)律的研究
　　目的:通過實驗分析不同擴張時期皮膚中,單位面積內膠原纖維含量的變化,以及I型和III型膠原纖維所占比例發(fā)生了怎樣的變化,并與正常未擴張皮膚中的膠原纖維特征進行比較,總結擴張過程中皮膚膠原纖維的變化規(guī)律。
　　方法:選擇動物實驗中不同擴張時期(擴張后第1到5周)的皮膚組織和正常未擴張的皮膚組織作為標本,進行Masson染色和天狼星紅染色,分別在光學顯微鏡和偏振光顯微鏡下觀察并拍照,用Ima

7、ge-Pro Plus6.0圖像分析軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結果:與正常未擴張的皮膚組織進行比較,擴張后的皮膚組織中單位面積內膠原纖維的含量降低,排列疏松;I型膠原纖維所占比例下降,III型膠原纖維所占比例升高。
　　結論:單位面積內膠原纖維含量的降低及I型和III型膠原纖維所占比例的變化可能是擴張后皮膚質地發(fā)生變化、回縮率高的主要原因。
　　第三部分真皮干細胞在擴張皮膚新生中作用的實驗假設與初步探索
　　目的:

8、通過本部分的實驗假設和初步探索,探究真皮干細胞在擴張應力作用下發(fā)生增殖分化的方向,希望能夠了解擴張皮膚組織中真皮部分的新生機制,為研究如何促進擴張皮膚新生奠定實驗基礎。
　　方法: Brdu活體標記新生SD鼠皮膚中的成體干細胞,在5周齡時構建皮膚軟組織擴張模型,取正常未擴張和擴張后第1-5周的皮膚組織作為標本,擬進行PCNA免疫熒光染色、Brdu免疫熒光染色和兩者的雙標共定位免疫熒光染色。并通過Brdu標記體外培養(yǎng)的293T細胞進

9、行免疫熒光染色,檢驗我們購買的抗體和染色技術。
　　結果:在擴張后的皮膚組織中能夠明顯觀察到綠色熒光的PCNA+細胞,PCNA+細胞的數(shù)目明顯比未擴張的皮膚組織中數(shù)量增多。在正常未擴張的皮膚組織中能夠觀察到少量呈綠色熒光的Brdu+細胞,但在擴張后的皮膚組織中尚未發(fā)現(xiàn)Brdu+細胞。Brdu標記293T細胞進行免疫熒光染色,Brdu+細胞占細胞總量的85％左右(表明購買的抗體、試劑具有較高的特異性,不會影響活體標記和組織學的染色;