臍血源神經(jīng)干細(xì)胞移植治療大鼠脊髓損傷模型后基因表達(dá)譜的變化及臨床初步應(yīng)用研究.pdf

1、目的:1.了解臍血源神經(jīng)干細(xì)胞(Umbilicalcordbloodneuralstemcells,UCBNSCs)移植治療大鼠脊髓損傷模型的后肢功能改善情況,篩選出UCBNSCs移植組和安慰劑對照組差異表達(dá)的基因,探討其中部分基因的功能及其與脊髓損傷后肢體功能恢復(fù)的可能關(guān)系,以期為脊髓損傷的基因治療提供參考。2.將UCBNSCs應(yīng)用到臨床實踐中治療陳舊性脊髓損傷患者,通過相關(guān)量表評估其有效性,希望為脊髓損傷患者提供一種新的治療措施。<

2、br>　　方法:1.60只健康雌性SD(Sprague-Dawley)大鼠隨機分為假手術(shù)組(n=10)、磷酸鹽緩沖液(phosphatebuffersaline,PBS)移植對照組(n=20)、UCBNSCs移植組(n=30)。假手術(shù)組僅在顯微鏡下行T9-11椎板打開,不做其他處理。后兩組打開T9-11椎板后橫斷脊髓,制作大鼠脊髓全斷模型。1w后UCBNSCs移植組行UCBNSCs(1×107/L細(xì)胞懸浮液10ul)腦室穿刺移植,對照組

3、用PBS代替,移植術(shù)后第2w、4w、8w分別處死SD大鼠4只,獲得損傷處脊髓樣本行免疫組化染色,觀察UCBNSCs在體內(nèi)的存活情況,及第2周時在體內(nèi)的分化。分別于移植后1d、1w、2w、4w、6w、8w分別對三組大鼠(分別n=10,17,16只)行BBB行為評分。第8周分別取PBS注射組和UCBNSCs移植組各7只SD大鼠,獲得脊髓損傷處組織樣本,行基因芯片分析,篩選出差異表達(dá)基因。2.臨床研究中,36名陳舊性脊髓損傷患者入院后采用脊髓

4、損傷神經(jīng)學(xué)分類國際標(biāo)準(zhǔn)(ASIA)對入選患者進(jìn)行評分,并通過導(dǎo)尿法測定患者膀胱殘余尿量。利用新生嬰兒臍帶血,在體外條件下分化成神經(jīng)干細(xì)胞,制成濃度為109/L的懸液,經(jīng)腰椎穿刺(L3-4或L4-5)注入蛛網(wǎng)膜下腔。術(shù)后3月重新對所有患者行ASIA評分和膀胱殘余尿量測定,以此來判斷UCBNSCs移植對脊髓損傷患者的臨床療效。
　　結(jié)果:1.假手術(shù)組術(shù)后各時間段后肢功能未出現(xiàn)明顯受損,PBS和UCBNSCs移植組造模后均出現(xiàn)了雙下肢不

5、同程度癱瘓、小便功能障礙等表現(xiàn)。隨著時間的延長,后肢功能有所恢復(fù),移植術(shù)后1d、1w兩組BBB評分無統(tǒng)計學(xué)差異,術(shù)后2w、4w、6w和8w兩組差別明顯,且P<0.05,具有統(tǒng)計學(xué)意義。移植的UCBNSCs在4w時在病灶周圍數(shù)量仍很大,并且能夠存活至少8w,第2w時UCBNSCs很少分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。兩組大鼠受損脊髓樣本的芯片分析篩選出24個差異表達(dá)基因,其中表達(dá)上調(diào)的有20個,表達(dá)下調(diào)有4個;2.陳舊性脊髓損傷患者UCBNSC

6、s移植術(shù)后,生命體征平穩(wěn),術(shù)后3月ASIA各項評分較前提高、膀胱殘余尿量減少且具有統(tǒng)計學(xué)意義,感覺和運動平面下降,患者的脊髓損傷狀況較前改善。
　　結(jié)論:1.UCBNSCs移植治療大鼠脊髓損傷有確切療效,與安慰劑對照組相比,UCBNSCs移植組術(shù)后8w有24個基因表達(dá)的量發(fā)生變化,可能與脊髓功能的恢復(fù)有一定的關(guān)系,為后續(xù)相關(guān)基因的研究打下初步基礎(chǔ)。2.UCBNSCs移植作為一種新的治療方法,可以改善陳舊性脊髓損傷患者肢體功能,提高