子宮內(nèi)膜癌中錯配修復(fù)基因hMLH1與PTEN突變、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的相關(guān)性研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜癌是常見的女性生殖道惡性腫瘤，其發(fā)病率逐年上升，嚴(yán)重威脅婦女健康。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生是多因素作用、多基因參與、多步驟的過程。但是子宮內(nèi)膜癌的確切發(fā)病機(jī)制并不清楚。子宮內(nèi)膜癌的分類方式很多，目前被大多數(shù)學(xué)者認(rèn)同的是將子宮內(nèi)膜癌分為兩型：Ⅰ型為子宮內(nèi)膜樣的子宮內(nèi)膜癌(EEC)，屬于雌激素依賴型，占85％較多見；Ⅱ型為非子宮內(nèi)膜樣子宮內(nèi)膜癌(NEEC)，屬于非雌激素依賴型，占15％。其中，Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌中最常見的分子水平改變?yōu)椋何⑿l(wèi)星不

2、穩(wěn)定性(MSI)和抑癌基因PTEN突變。通過對錯配修復(fù)基因hMLH1、抑癌基因PTEN蛋白表達(dá)的測定以及微衛(wèi)星不穩(wěn)定性和PTEN基因突變的檢測，從錯配修復(fù)基因缺失所導(dǎo)致的遺傳不穩(wěn)定角度來探討子宮內(nèi)膜癌中發(fā)生PTEN突變的可能機(jī)制。本研究從核酸和蛋白水平探討三者的相關(guān)性。為子宮內(nèi)膜癌的病因?qū)W研究和早期診斷以及高危人群篩查提供理論依據(jù)。 研究方法： 1.應(yīng)用免疫組化S-P法檢測40例子宮內(nèi)膜癌、22例子宮內(nèi)膜不典型增生、23

3、例正常子宮內(nèi)膜中錯配修復(fù)基因hMLH1和抑癌基因PTEN的表達(dá)。探討二者與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系及二者在子宮內(nèi)膜癌變過程中表達(dá)的情況。 2.應(yīng)用PCR方法檢測實(shí)驗(yàn)組中5個微衛(wèi)星位點(diǎn)(D2S123、D10S197、D13S175、D10S215、D10S541)的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性。研究在子宮內(nèi)膜癌變過程中微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的變化以及與錯配修復(fù)基因hMLH1表達(dá)的關(guān)系。 3.應(yīng)用Western-blot方法檢測正常子宮內(nèi)膜、

4、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜癌高、中、低分化5組，每組5例中的錯配修復(fù)基因hMLH1蛋白表達(dá)變化。并根據(jù)Western-blot結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證應(yīng)用免疫組化方法檢測hM-LH1蛋白表達(dá)的可行性、準(zhǔn)確性。 4.應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析法(PCR-SSCP)和DNA序列分析法，檢測40例子宮內(nèi)膜癌和22例子宮內(nèi)膜不典型增生、23例正常子宮內(nèi)膜組織中PTEN第5、第8外顯子突變情況和突變測序。探討內(nèi)膜癌中PTEN突變和微衛(wèi)星

5、不穩(wěn)定性之間的關(guān)系以及可能的發(fā)生機(jī)制。 研究結(jié)果： 1.錯配修復(fù)基因hMLH1和抑癌基因PTEN在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)逐漸下降，差異有顯著性(p＜0.01)。其中PTEN蛋白表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌前病變—子宮內(nèi)膜不典型增生中就發(fā)生了明顯的改變，在此期間PTEN突變率也有了顯著的變化(p＜0.01)。 2.應(yīng)用免疫組化方法和Western-blot方法檢測錯配修復(fù)基因hMLH1蛋白的表達(dá)均

6、與內(nèi)膜癌組織分化程度有關(guān)(p＜0.05)；hMLH1蛋白在內(nèi)膜癌G1和G2期表達(dá)均為陽性；PTEN突變與內(nèi)膜癌手術(shù)分期有關(guān)(P＜0.05)。二者與內(nèi)膜癌的其他臨床病理參數(shù)無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)(P＞0.05)；抑癌基因PTEN的表達(dá)和內(nèi)膜癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)(P＞0.05)。而PTEN基因突變和微衛(wèi)星不穩(wěn)定性均只發(fā)生在子宮內(nèi)膜樣腺癌中。 3.子宮內(nèi)膜癌中微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的發(fā)生與錯配修復(fù)基因hMLH1的失表達(dá)密切相

7、關(guān)(Pearson相關(guān)系數(shù)r=1，P＜0.01)。在微衛(wèi)星不穩(wěn)定性陽性的內(nèi)膜癌中發(fā)生PTEN突變率高于微衛(wèi)星不穩(wěn)定性陰性的內(nèi)膜癌(P＜0.05)。微衛(wèi)星不穩(wěn)定性和PTEN突變在內(nèi)膜癌中發(fā)生率顯著高于正常子宮內(nèi)膜(P＜0.05)。 4.發(fā)生PTEN突變進(jìn)行DNA測序的病例中有2例內(nèi)膜癌(2/11，18.2％)突變發(fā)生在PTEN第8外顯子的poly(A)區(qū)域。 5.應(yīng)用免疫組化S-P和Western-blot方法檢測hMLH

8、1蛋白在子宮內(nèi)膜癌變過程中的表達(dá)具有相同的趨勢，結(jié)果相似。 結(jié)論： 1.抑癌基因PTEN突變和微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)是Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌發(fā)生過程中重要的分子水平改變。PTEN突變導(dǎo)致蛋白表達(dá)缺失在內(nèi)膜癌癌變過程中可能不是關(guān)鍵的一步但卻是一個早期事件，應(yīng)用免疫組化方法檢測PTEN蛋白的表達(dá)可以作為內(nèi)膜癌早期診斷的一個指標(biāo)；內(nèi)膜癌中錯配修復(fù)基因hMLH1的失表達(dá)與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性密切相關(guān)，免疫組化S-P方法檢測hMLH1蛋白的表