豬卵母細胞體外受精和孤雌激活的初步研究.pdf

1、對豬卵母細胞體外受精(IVF)和孤雌激活(PA)的研究，有助于揭示卵母細胞活化機制和受精機理，為優(yōu)化早期胚胎體外生產(chǎn)系統(tǒng)提供理論依據(jù)。體外成熟42-46h的豬卵母細胞，與最終濃度為1×106個/ml的精液共孵育6h，或用Ionomycin(5min)+6-DMAP(4h)聯(lián)合激活，最后在胚胎培養(yǎng)液NCSU-23中進行體外培養(yǎng)，48h后檢查卵裂率，第168h記錄囊胚發(fā)育情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 1)本研究選用的TL-Hepes液、DPBS

2、液、TCM-199(Ⅰ)液和TCM-199(Ⅱ)液作為洗卯液，豬卵母細胞在體外成熟培養(yǎng)42-46h后的核成熟率分別為：57.35％、58.11％、58.11％和57.81％，體外受精后第48小時卵裂率分別為：70.82％、71.35％、74.92％和73.79％，第168小時囊胚率分別為：5.16％、4.62％、4.85％和5.02％，核成熟率之間、卵裂率之間、囊胚率之間均無顯著差異(P>0.05)。說明四種洗卵液均可用于豬卵母細胞的洗

3、滌，但從配制及價格上考慮，DPBS液是最佳選擇。 2)成熟液中添加8.巰基乙醇(10、50μmol/L)對豬卵母細胞IVF或PA后胚胎體外發(fā)育沒有明顯的促進作用，當濃度達到250μ/mol/L時卵裂率和囊胚率明顯下降[0、10、50μmol/L組和250μmol/L組經(jīng)IVF后卵裂率分別為：59％、59.55％、61.06％vs.50.86％，p<0.05；囊胚率分別為：5.86％、6.36％、6.19％vs.3.02％，p<0

4、.05。經(jīng)PA后卵裂率分別為：79.43％、79.25％、78.13％vs.66.35％，p<0.05；囊胚率分別為：19.62％、20.28％、18.30％vs.9.62％；p<0.05]。 3)受精液中添加B.巰基乙醇(2、10、5μmol/L)對豬卵母細胞IVF后的早期胚胎發(fā)育沒有明顯的促進作用，當濃度達到250μmol/L時卵裂率和囊胚率明顯下降[0、2、10、5μmol/L組和250μmol/L組的卵裂率分別為：78.

5、26％、75.68％、77.88％、74.11％VS.55.08％，p<0.05；囊胚率分別為：6.01％、6.38、6.49％、5.65％vs.1.71％，p<0.05]。 4)受精液中添加BSA(0.1-0.8％BSA)對豬卵母細胞IVF后胚胎體外發(fā)育可能具有促進作用(各試驗組與對照組的囊胚率分別為：1.76％、3.20％、3.60％、3.52％vs.0.40％；p=0.07)，但其效果有待進一步驗證。 5)在受精液

6、中添加咖啡因(1、2、4mM)對豬卵母細胞的IVF及早期發(fā)育與對照組相比沒有明顯提高的效果[各試驗組與對照組的囊胚率分別為：1.51％、1.81％、1.52％vs.2.45％；p>0.05]。 6)無極體卵母細胞經(jīng)IVF或PA后也可以發(fā)育至囊胚階段，但發(fā)育能力比有極體的卵母細胞差[經(jīng)IVF后卵裂率分別為：55.40％vs.62.19％，p>0.05；囊胚率分別為：2.33％vs.4.87％，p<0.05。經(jīng)PA后卵裂率分別為：6