JNK1，p38MAPK在三氧化二砷抑制膽管癌細(xì)胞增殖中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：膽管癌是肝膽系統(tǒng)第二位常見的惡性腫瘤，目前以手術(shù)治療為主，手術(shù)根治切除率低，效果差，故臨床上迫切需要找到更有效的治療方法。近年發(fā)現(xiàn)三氧化二砷對(duì)膽管癌有效，其抗瘤機(jī)制主要是抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。JNK1、p38MAPK是絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族的重要成員，參與凋亡和細(xì)胞增殖的調(diào)控，本試驗(yàn)主要研究JNK1、p38MAPK mRNA在三氧化二砷抑制膽管癌細(xì)胞增殖中的表達(dá)。進(jìn)而為膽管癌治療的可行途徑提供線索。

2、 方法：常規(guī)培養(yǎng)人膽管癌細(xì)胞QBC939，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)：以倒置顯微鏡觀察對(duì)照組細(xì)胞(不含三氧化二砷的培養(yǎng)液)形態(tài)和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞(8μmol/L三氧化二砷)8、24、48小時(shí)形態(tài)變化，以透射電鏡觀察正常膽管癌細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和8μmol/L及16μmol/L三氧化二砷作用24小時(shí)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化；CCK—8法：用酶標(biāo)儀檢測(cè)接種于96孔板的實(shí)驗(yàn)組(分2、4、8、16μmol/L4個(gè)三氧化二砷的

3、濃度組，每一濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔)和對(duì)照組各孔細(xì)胞的吸光度A值，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率；實(shí)驗(yàn)組(4、8、16μmol/L三氧化二砷)、對(duì)照組分別在12小時(shí)終止培養(yǎng)，每個(gè)樣品細(xì)胞數(shù)達(dá)1×106個(gè)，Trizol法裂解細(xì)胞，提取總RNA，行半定量RT-PCR檢測(cè)JNK1 mRNA、p38MAPK mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：⑴倒置相差顯微鏡：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞變圓，細(xì)胞間隙增大，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，貼壁能力明顯下降，隨著As2O3濃度的增加和培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，壞死

4、脫落漂浮的細(xì)胞逐漸增多。⑵8μmol/L三氧化二砷作用24小時(shí)，可見細(xì)胞核內(nèi)異染色質(zhì)凝聚，染色質(zhì)邊集，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空泡；16μmol/L三氧化二砷作用24小時(shí)，染色質(zhì)邊集，直至核膜溶解，染色質(zhì)碎裂成塊，細(xì)胞凋亡壞死。⑶各濃度As2O3均對(duì)QBC939細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用，隨著三氧化二砷濃度的增加，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率升高，除72h4μmol/L，8μmol/L濃度組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P>0.05)，各濃度組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)

5、；細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率隨著三氧化二砷干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)而增高，除2μmol/L作用48與72小時(shí)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，同濃度三氧化二砷不同時(shí)間作用組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑷常規(guī)培養(yǎng)的QBC939細(xì)胞，JNK1、p38MAPK mRNA均有不同程度的表達(dá)，JNK1 mRNA、p38MAPK mRNA的表達(dá)水平分別為：0.53、1.98；三氧化二砷干預(yù)后，JNK1 mRNA有明顯上調(diào)趨勢(shì)，而p38MAPK mRNA有下調(diào)趨勢(shì)。 結(jié)