一種SD大鼠皮膚光老化動(dòng)物模型的建立.pdf

1、人類皮膚的老化是一個(gè)非常復(fù)雜而漫長(zhǎng)的過程，主要受遺傳因素及環(huán)境因素的影響。遺傳因素引起的皮膚老化稱為自然老化;在環(huán)境因素中，又以紫外線的影響最大，所以由環(huán)境因素引起的皮膚老化又稱為光老化。皮膚光老化有特定的發(fā)生原因和影響因素，與自然老化相比皮膚光老化具有特征性的臨床表現(xiàn):皮膚變薄、失去彈性、正常的皮紋加深，而光老化則表現(xiàn)為皮膚粗糙、深亂皺紋、色素沉著或脫失、癌前病變，癌變，并伴有相應(yīng)的組織學(xué)及分子生物學(xué)水平的改變。造成光老化的紫外線主要

2、由長(zhǎng)波(UVA320-400nm)和中波(UVB290-320nm)組成，其中UVB是造成皮膚損傷的主要原因。目前臨床皮膚光老化疾病的發(fā)病機(jī)制尚不明確，因此建立光老化動(dòng)物模型對(duì)研究光老化機(jī)制和治療光老化疾病有著重要的意義。因此，如何建立一種模擬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便和評(píng)價(jià)指標(biāo)明確的光老化動(dòng)物模型一直是研究熱點(diǎn)，但目前國(guó)內(nèi)外皮膚光老化實(shí)驗(yàn)研究動(dòng)物模型的造模方法，以及檢驗(yàn)?zāi)Ｐ偷某晒εc否仍沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。
　　 目的:
　　 針對(duì)建立一

3、種實(shí)用的皮膚光老化動(dòng)物模型的關(guān)鍵步驟與方法進(jìn)行探討，并針對(duì)光老化動(dòng)物模型建立過程中的幾個(gè)關(guān)鍵問題進(jìn)行探討，以期為皮膚光老化的研究提供試驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 材料和方法:
　　 選擇健康雄性SD大鼠20只，隨機(jī)分2組，空白對(duì)照組10只、光老化模型組10只。用標(biāo)記筆標(biāo)出預(yù)照射范圍，去除該范圍內(nèi)毛發(fā)，造模組用紫外線光療儀進(jìn)行照射，每天一次，每次15分鐘，共8周時(shí)間。造模完成后分別切取兩組大鼠背部皮膚，每份標(biāo)本分為兩份，一份立即投入液

4、氮，然后置于-80℃冰箱保存以備提取RNA用;另一份經(jīng)固定、脫水、石蠟包埋后切片、常規(guī)染色，顯微鏡下觀察并采圖。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法熒光定量PCR結(jié)果分析，用2-△△Ct的方法將Ⅰ型、Ⅲ型膠原與內(nèi)參基因β-actin做對(duì)比，以2-△△Ct值對(duì)每組樣本的Ⅰ型、Ⅲ型膠原mRNA相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行比較分析，2-△△Ct值≥2或≤0.5有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.肉眼觀光老化組大鼠背部皮膚增厚，粗糙，并出現(xiàn)明顯的粗

5、大溝紋。組織病理HE染色鏡下可見，光老化組大鼠較對(duì)照組表皮增厚，真皮膠原變性、斷裂、減少、排列紊亂，甚至凝集呈塊狀，少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 2.熒光定量PCR結(jié)果顯示光老化組大鼠皮膚Ⅰ型、Ⅲ型膠原△Ct值明顯低于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.選取SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，操作性強(qiáng)，8周即可完成光老化動(dòng)物模型的建立。
　　 2.光老化模型組比對(duì)照組大鼠皮膚的Ⅰ型、Ⅲ型膠原的mRNA表達(dá)