miR-338-5p靶向作用于TRAF3參與腎移植術后抗體介導的免疫排斥.pdf

1、目的：本課題旨在研究miR-338-5p在腎移植患者的表達特點,及其對BAFF信號的調控作用,進而探討其在抗體介導的腎移植排斥中的作用及意義。
　　方法：⑴采用共轉染方法,利用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)進行miR-338-5p的靶基因驗證。⑵收集腎移植患者的血清(健康志愿者為對照),應用real-time PCR法檢測患者血清中miR-338-5p的表達差異;ELISA法檢測血清sBAFF的表達量;液相芯片技術檢測血清中抗HLA-

2、Ⅰ類抗體、抗HLA-Ⅱ類抗體、抗MICA抗體滴度。從而分析miR-338-5p、sBAFF、抗體間的相關性。⑶在體外試驗中,采用以抗IgM抗體和/或重組人BAFF蛋白刺激的CD20+扁桃體B細胞培養(yǎng)體系,觀察miR-338-5p激動劑/拮抗劑、及TRAF3 siRNA干擾作用下,B細胞分泌IgG、IL-10的水平,來分析miR-338-5p對B細胞生物學功能的影響。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行分析。兩個獨立樣本均數間的比較采用雙側

3、t檢驗;配對樣本均數間的比較采用配對樣本t檢驗;相關性分析采用Spearman法及Pearson法;P<0.05被認為具有統(tǒng)計學意義。
　　結果：①雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)驗證結果表明TRAF3和NF-κB1均是miR-338-5p的靶分子,TRAF3被負向調控,NF-κB1被正向調控;②與健康對照組比較,腎移植受者血清miR-338-5p水平顯著下降(P<0.001)、血清sBAFF水平顯著增高(P<0.01)。移植術后1年內

4、者血清miR-338-5p水平顯著低于移植術后1年以上者(P<0.01);移植術后3年內者血清miR-338-5p水平顯著低于移植術后3年以上者(P<0.01);③對全部研究對象進行統(tǒng)計分析顯示,血清miR-338-5p與sBAFF、抗HLA-Ⅱ抗體均呈顯著負相關,相關系數分別為-0.51(P<0.001)、-0.322(P<0.05);術后3年內者,血清miR-338-5p與抗HLA-Ⅱ抗體、抗MICA抗體均呈顯著負相關,相關系數分別

5、為-0.423(P<0.05)、-0.411(P<0.05);術后3年以上者,血清miR-338-5p與抗MICA抗體、抗HLA&MICA抗體均呈顯著正相關,相關系數分別為0.486(P<0.05)、0.578(P<0.01);⑷CD20+B淋巴細胞的體外培養(yǎng)試驗結果顯示,存在BAFF信號共同作用時,miR-338-5p經靶向作用于TRAF3增強了BAFF信號,使得B細胞分泌IgG顯著增多(132±5.29ng/ml vs155±5.5