血管生成素與堿性成纖維生長因子之間相互作用關(guān)系及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、血管生成素和堿性成纖維生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）是重要的促血管生長因子，調(diào)節(jié)著細(xì)胞的增殖、分化和遷移，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。目前關(guān)于血管生成素和bFGF之間相互作用關(guān)系的研究還很少，本論文的研究目的在于探究腫瘤細(xì)胞中血管生成素和bFGF之間的相互作用關(guān)系及其分子調(diào)控機(jī)制。我們首先在肝癌細(xì)胞中建立了高表達(dá)和低表達(dá)bFGF的細(xì)胞株，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高表達(dá)bFGF的細(xì)胞株中血管生成

2、素的表達(dá)降低，而低表達(dá)bFGF的細(xì)胞株中血管生成素的表達(dá)反而升高。在細(xì)胞增殖分析中，我們觀察到高表達(dá)bFGF的細(xì)胞株細(xì)胞增殖增加，而低表達(dá)bFGF的細(xì)胞株細(xì)胞增殖降低。這一部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，內(nèi)源的bFGF負(fù)調(diào)控血管生成素的表達(dá)，并且對肝癌細(xì)胞的細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用。接著我們在HeLa細(xì)胞中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了血管生成素的正義和反義基因，建立了高表達(dá)和低表達(dá)血管生成素的穩(wěn)定細(xì)胞株，檢測bFGF的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染正義血管生成素基因的細(xì)胞株bFGF的

3、表達(dá)量降低了，而轉(zhuǎn)染反義血管生成素基因的細(xì)胞株bFGF的表達(dá)量升高了，實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了血管生成素對bFGF基因的表達(dá)有負(fù)調(diào)控作用。 我們的工作證實(shí)了在腫瘤細(xì)胞中bFGF可以負(fù)調(diào)控血管生成素的表達(dá)，同時在轉(zhuǎn)染血管生成素基因的細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)血管生成素負(fù)調(diào)節(jié)bFGF的表達(dá)，這在腫瘤血管生成因子的研究中是個新現(xiàn)象，探討這兩個因子之間相互作用關(guān)系的分子機(jī)制將有助于腫瘤血管生成方面的研究，對靶向腫瘤血管生成的腫瘤治療有重要的指導(dǎo)意義。目前

4、關(guān)于血管生成素和bFGF調(diào)控機(jī)制的線索還比較少，根據(jù)已有的信息我們提出了兩個假設(shè)：1．血管生成素作為反式作用因子參與bFGF基因的調(diào)控；2．血管生成素與bFGF之間可能存在著負(fù)反饋調(diào)節(jié)。首先，我們在293T細(xì)胞中檢測了血管生成素對bFGF啟動子熒光素酶報(bào)告基因活性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血管生成素抑制了bFGF啟動子的活性，進(jìn)而參與bFGF基因的表達(dá)調(diào)控。通過檢測不同長度的bFGF啟動子活性，進(jìn)一步限定了血管生成素在bFGF啟動子上的作用區(qū)間在

5、-970bp與-834bp之間。其次，我們通過實(shí)驗(yàn)初步驗(yàn)證了血管生成素與bFGF之間存在著負(fù)反饋，用外源的bFGF刺激共轉(zhuǎn)染血管生成素表達(dá)質(zhì)粒和bFGF啟動子質(zhì)粒的293T細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)外源bFGF的加入補(bǔ)償了血管生成素對bFGF啟動子活性的抑制。因此，我們的結(jié)論是血管生成素與bFGF之間的負(fù)反饋調(diào)節(jié)是血管生成素抑制bFGF啟動子活性，下調(diào)bFGF蛋白的表達(dá)，進(jìn)而又負(fù)反饋地抑制了bFGF的基因表達(dá)。本論文的研究結(jié)果為腫瘤血管生成方面的研