AEs蛋白在實驗性心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷中的差異性表達(dá).pdf

1、目的：研究AEs蛋白各亞型在實驗性心肌細(xì)胞A/R損傷中的表達(dá)并探討其作用。 方法： SD新生大鼠(1～3d)，無菌取出乳鼠心臟，經(jīng)分離、消化與純化獲得心肌細(xì)胞；在培養(yǎng)的第4 d隨機(jī)分為4組：正常對照(Contro1)組、A/R組、缺氧預(yù)處理早期相(APC—EP)組及缺氧預(yù)處理延遲相(APC—DP)組。分別觀察以下指標(biāo)：①心肌細(xì)胞搏動頻率；②細(xì)胞存活率(MTT法)；③培養(yǎng)液中LDH活性；④RT-PCR法檢測心肌細(xì)胞中AE1、AE2

2、、AE3的mRNA含量；⑤WesternBlotting法檢測心肌細(xì)胞中AE1、AE2、AE3蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：①細(xì)胞搏動頻率：A/R組(13±3 beats/min)與Control組(95±17beats/min)相比，有顯著性差異(P<0.01)；APC-EP組(91±8 beats/min)、APC-DP組(90±9 beats/min)則無明顯改變(P>0.05)，與A/R組比較均有顯著性差異(均OP<0.01)。②

3、細(xì)胞存活率：A/R(38.3±3．6％)組與Control(90.2±9.3％)組比較，有顯著差異(P<0.01)；APC-EP組(85.1±10.1％)、APC-DP組(84.6±9.8％)分別與A/R組比較，有顯著性差異(均P<0.01)，APC-EP組、APC-DP組之間無顯著性差異(p>O.05)。③LDH活性：A/R組(40.36±4.88 IU/L)與Control組(4.16±0.49 IU/L)比較，有顯著性差異(P<0

4、.01)；APC-EP組(13.12±2.06 IU/L)、APC-DP組(11.95±2.81IU/L)分別與A/R組比較，有顯著性差異(P<0.01)，APC-EP組、APC-DP組之間無顯著性差異(p>O.05)。④AEs蛋白各亞型mRNA的表達(dá)：Control組、A/R組、APC-EP組、APC-DP組AEl mRNA表達(dá)量分別為0.31±0.06、0.32±0.O5、0.93±0.15、1.43±0.12。APC-EP組、AP

5、C-DP組較Control組與A/R組AEI mRNA轉(zhuǎn)錄均顯著上調(diào)(P<0.01)，A/R組與Control組無明顯差異(P<0.05)，DP相的表達(dá)量較EP相的更高(P<0.05)。Control組、A/R組、APC-EP組、APC-DP組AE2 mRNA表達(dá)量分別為0.69±0.16、1.51±0.19、0.79±0.22、0.86±0.20；A/R組與Control組相比，AE2 mRNA轉(zhuǎn)錄明顯上調(diào)(P<0.01)；APC-E

6、P組、APC-DP組較Control組均無顯著差別(P>0.05)，且兩者之間也無顯著性差異(p>0.05)。Control組、A／R組、APC-EP組、APC-DP組AE3 mRNA表達(dá)量分別為0.27±0.08、0.40±0.06、1.44±0.04、1.71±0.07；A／R組AE3 mRNA轉(zhuǎn)錄較Control組增加(p<0.05)，APC-EP組、APC-DP組AE3 mRNA不僅均較Control組轉(zhuǎn)錄顯著上調(diào)(p<0.01

7、)，且較A／R組也顯著上調(diào)(p<0.01)；APC-DP組AE3 mRNA較APC-EP組轉(zhuǎn)錄增加(p<0.05)。⑤AEs各亞型蛋白的表達(dá)：Control組、A／R組、APC-EP組、APC-DP組AEI蛋白表達(dá)量分別為0.29±0.07、0.36±0.05、1.17±0.15、1.31±0.12；APC-EP組、APC-DP組較Control組AE1蛋白表達(dá)均顯著增加(p<0.01)，且較A／R組也明顯上調(diào)(p<0.01)；APC-

8、DP組較APC-EP組上調(diào)更為明顯(p<0.05)；A／R組較Control組有增高的趨勢，但無明顯差異(p>0.05)。Control組、A／R組、APC-EP組、APC-DP組AE2蛋白表達(dá)量分別為0-17±0.03、0.45±0.08、0.24±0.05、0.20±0.04：A／R組與Control組相比，AE2蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(p<0.01)；APC-EP組、APC-DP組、Control組間均無顯著差別(p>0.05)。Con

9、trol組、A／R組、APC-EP組、APC-DP組AE3蛋白表達(dá)量分別為0.23±0.06、0.36±0.08、0.86±0.08、1.07±0.10：A／R組AE3蛋白表達(dá)較Control組增加(P<0.05)；APC-EP組、APC-DP組AE3蛋白不僅均較Control組表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.01)，且較A／R組也明顯上調(diào)(P<0.01)；APC-DP組較APC-EP組上調(diào)更為明顯(P<0.05)。 結(jié)論：AE1、AE2