馬錢子在靜水壓下對人腰椎間盤蛋白多糖合成影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　目的：在骨科領(lǐng)域中,對于脊柱退行性疾病,其最終解決的是如何抑制椎間盤組織的退變和促使椎間盤組織的再生。目前椎間盤退變與再生研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)是對于基質(zhì)蛋白多糖(PG)的研究,深入研究基質(zhì)蛋白多糖(PG)在人椎間盤退變過程中的代謝(本課題主要研究合成)及其與各影響因素(本課題主要是研究靜水壓)之間的關(guān)系,對于人椎間盤退行性疾病的預(yù)防、診斷和治療具有十分重要的意義。本研究課題是建立在國內(nèi)外先進(jìn)的研究方法基礎(chǔ)之上,結(jié)合中西醫(yī)治療人椎間盤突出癥

2、的經(jīng)驗(yàn),從人腰椎間盤摘除術(shù)的志愿者中獲取新鮮的椎間盤組織樣品,以中藥馬錢子溶液通過體外培養(yǎng)在靜水壓下(1atm)對人腰椎間盤蛋白多糖(PG)合成進(jìn)行干預(yù),對獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。如果在退變的人椎間盤組織蛋白多糖的合成中馬錢子的作用得到明了,則提示可采用馬錢子或馬錢子復(fù)方制劑延緩椎間盤的退變過程,為臨床上預(yù)防和延緩腰椎間盤退行性變開辟一條新的途徑。
　　方法：實(shí)驗(yàn)一,將24孔培養(yǎng)板分成4組,分別是空白組即對照組Ⅰ(不添加馬錢子溶液

3、)；馬錢子溶液低劑量組Ⅱ；馬錢子溶液中劑量組Ⅲ；馬錢子溶液高劑量組Ⅳ。探討馬錢子對蛋白多糖(PG)合成影響的最佳劑量。按分組要求椎間盤組織培養(yǎng)基中分別加入不同劑量的馬錢子溶液,在1atm下,37℃培養(yǎng)2小時(shí),然后取上清液,離心,重復(fù)取上清液,-20℃保存,待檢測蛋白多糖(PG)含量。蛋白多糖(PG)含量檢測：采用考馬斯亮藍(lán)蛋白定量檢測法。分光光度儀于 595 nm波長處測定OD值。結(jié)果以g/L表示。實(shí)驗(yàn)二,按分組要求椎間盤組織培養(yǎng)基中加

4、入不同劑量馬錢子溶液、L-NMA及SNAP,在1atm的靜水壓下,37℃培養(yǎng)2小時(shí)后,然后取上清液,高速離心機(jī)離心,重復(fù)取上清液,-70℃保存,待檢測蛋白多糖含量。這里我們采用的是考馬斯亮藍(lán)蛋白定量檢測法,檢測蛋白多糖含量,結(jié)果以g/L表示。然后用蘇木精一伊紅(HE)染色行組織學(xué)觀察。最后行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 ±s表示。采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。P<0.05為有顯著性差異。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)一結(jié)果：馬錢子可以有效抑制人椎間盤髓核

5、組織NO釋放量,促進(jìn)蛋白多糖(PG)的合成,而且有劑量依賴性。其中,低劑量組與空白組相比無顯著性差異；中、高劑量組與空白組相比有顯著性差異,其中中等劑量組中 2.5 mg∕ml差異最為明顯(P<0.01)；高劑量組與中劑量組相比,其對NO釋放量和蛋白多糖(PG)合成的影響較為降低,我們考慮隨著藥物劑量的增加,其可能對人椎間盤基質(zhì)的代謝有一定的抑制作用,具體的藥效學(xué)作用原理尚有待進(jìn)一步研究。因此,適當(dāng)劑量馬錢子溶液可以促進(jìn)人椎間盤髓核組織

6、蛋白多糖(PG)的合成,從而延緩椎間盤的退變,其復(fù)雜的作用機(jī)制有進(jìn)一步研究的必要。實(shí)驗(yàn)二結(jié)果：在培養(yǎng)基中添加中等劑量的馬錢子溶液(2.5mg∕ml)后,NO產(chǎn)生量明顯減少,蛋白多糖(PG)合成率明顯增加。與在培養(yǎng)基中添加NO合成酶抑制劑(L-NM MA)相比無顯著性差異(P>0.05),而與培養(yǎng)基中添加NO的供體(SNAP)相比有顯著性差異(P<0.01),說明中等劑量馬錢子溶液確實(shí)能夠促進(jìn)蛋白多糖(P G)的合成。
　　結(jié)論