銀杏內(nèi)酯B在豚鼠腸缺血-再灌注損傷中對(duì)腹腔神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　 通過(guò)夾閉豚鼠腸系膜上動(dòng)脈，建立豚鼠腸缺血/再灌注（ischemia/reperfusion，I/R）損傷模型，觀察豚鼠腸粘膜形態(tài)學(xué)的變化、離體腹腔神經(jīng)節(jié)（celiac ganglia，CG）神經(jīng)元的存活情況、CG神經(jīng)元靜息電位（resting potential，RP）、動(dòng)作電位（action potential，AP）的特征性改變，從形態(tài)學(xué)和電生理學(xué)等方面評(píng)價(jià)銀杏內(nèi)酯B（ginkgolide B，GB）在豚鼠I/

2、R模型中對(duì)CG神經(jīng)元的保護(hù)作用。
　　 方法:
　　 1.動(dòng)物分組 30只豚鼠，體重250～300 g，隨機(jī)分為三組：正常組、缺血/再灌注損傷組（I/R組）和I/R+GB組（2.5×10-6mol/L）。
　　 2.離體CG標(biāo)本和腸組織標(biāo)本的制備選用健康成年豚鼠，擊后腦致昏迷，經(jīng)頸總動(dòng)脈放血致死。剖開(kāi)腹腔，取小腸和結(jié)腸組織用10％甲醛固定。摘取CG并迅速移至灌流浴槽內(nèi)進(jìn)行固定，分離并清除CG周圍的脂肪和結(jié)締組織，

3、用Krebs液持續(xù)、恒速灌流。進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)生物電記錄，作為正常組。
　　 參照Koike等人的方法復(fù)制腸I/R模型。豚鼠麻醉固定，經(jīng)腹正中切口，分離腸系膜上動(dòng)脈，用微動(dòng)脈夾夾閉其根部,于 30～45min后松開(kāi)動(dòng)脈夾,進(jìn)行再灌注1 h。模型建立后，立即經(jīng)頸總動(dòng)脈放血處死，摘取小腸和結(jié)腸組織用10％甲醛固定。游離并摘取CG，用Krebs液灌流，進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)記錄，作為I/R組。
　　 如上制備腸I/R模型，取CG，用含GB（2.

4、5×10-6mol/L）的Krebs液恒速連續(xù)灌流10min，每隔30min灌流給藥一次，進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)記錄，作為I/R+GB組。
　　 3.細(xì)胞內(nèi)生物電記錄在連續(xù)變倍體視顯微鏡下，將內(nèi)充KC1溶液的玻璃微電極通過(guò)微電極操縱儀推進(jìn)至CG表面，并刺穿細(xì)胞，記錄RP。向細(xì)胞內(nèi)注入去極化方波電流，引發(fā)細(xì)胞AP，進(jìn)行記錄。所記錄的生物電信號(hào)經(jīng)微電極放大器送至生物信號(hào)采集分析系統(tǒng)進(jìn)行處理并通過(guò)計(jì)算機(jī)監(jiān)測(cè)和記錄。向細(xì)胞內(nèi)注入的方波電流由三通道電

5、子刺激器通過(guò)隔離器提供。
　　 4.組織學(xué)觀察在細(xì)胞內(nèi)生物電記錄結(jié)束后，腸組織標(biāo)本和CG標(biāo)本分別用10％甲醛固定，常規(guī)石蠟切片，進(jìn)行HE染色，觀察組織形態(tài)變化。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，其他組間資料采用單因素方差分析和兩樣本t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以`c±s表示。
　　 結(jié)果:
　　 1.腸I/R損傷后，腸黏膜的形態(tài)學(xué)變化與正常組相比，I/R組腸絨毛頂端上皮下間隙明顯增

6、大，絨毛上皮和固有層出現(xiàn)部分剝離，并伴有絨毛上皮脫落現(xiàn)象。小腸黏膜的病理變化采用Chiu’s評(píng)分法進(jìn)行評(píng)分，I/R組評(píng)分明顯高于正常組（p<0.05）。與正常組相比，I/R組結(jié)腸組織表現(xiàn)出固有層腺體細(xì)胞減少，部分發(fā)生萎縮變性，胞漿粘液增多。這些結(jié)果提示腸I/R模型建立成功。
　　 2.GB對(duì)CG神經(jīng)元的保護(hù)作用2.1 CG神經(jīng)元RP的變化胞內(nèi)記錄三組離體CG神經(jīng)元的RP。正常組RP一般為56.02±8.32 mV(n=87)，相

7、對(duì)于正常組，I/R組RP不穩(wěn)定(p<0.05)；經(jīng)灌流GB后，RP基本恢復(fù)到正常水平(p＞0.05)。
　　 2.2 CG神經(jīng)元AP的變化三組CG細(xì)胞內(nèi)注入同樣的去極化方波電流，在正常組剛好引起CG神經(jīng)元去極化并誘發(fā)AP；與正常組相比，I/R組產(chǎn)生AP的神經(jīng)元數(shù)量明顯減少(n=3，p<0.05)，然而經(jīng)GB灌流后，部分神經(jīng)元AP發(fā)放頻率逐漸恢復(fù)至正常水平(n=15，p＞0.05)。
　　 2.3 CG形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化 HE