高級氧化蛋白產物（AOPPs）的表征.pdf

1、自由基攻擊血漿蛋白，引起后者發(fā)生氧化修飾而生成一種新型尿毒癥標志一高級氧化蛋白產物(AOPPs，AdvancedOxidativeProteinProducts)。其中，血漿白蛋白作為人體內生物大分子抗氧化體系中的主要組成部分是自由基攻擊的主要對象。先前的研究已證明尿毒癥病人血漿白蛋白發(fā)生氧化修飾高于正常人，為了解自由基攻擊對白蛋白分子結構產生何種影響，本文對正常人和尿毒癥病人血漿白蛋白的氨基酸組成進行了分析。方法：以正常人為對照組、尿

2、毒癥病人為實驗組，AOPPs和羰基為氧化應激指標，先對各組的氧化應激水平進行評價。隨后應用二維色譜法從各組血漿中分離、純化出白蛋白，并對分離、純化的色譜條件進行優(yōu)化分析。色譜條件的優(yōu)化包括流速、蛋白載量、溫度、離子強度、有機改性劑用量等。第一維色譜采用高效凝膠色譜法(HP-SEC)，第二維色譜采用反相色譜法(RP-HPLC)。純化出的血漿白蛋白經過HP-SEC、RP-HPLC、克分子吸光系數等方法進行純度鑒別。獲得高純的血漿白蛋白后，再

3、對其氨基酸組成進行分析比較。結果：尿毒癥病人的AOPP水平要高出正常人的近一倍(正常人～病人=71．07+13．90～161．91+19．89，p<0．001)，羰基水平也高出正常人一倍(正常人～病人=0．75±0．07～1．64±O．13，p<0．001)。已知人白蛋白的克分子吸光系數口￡280cm=35,200M-1cm-1，測得用作對照的標準白蛋白的克分子吸光系數為355¨+528Mqcm-1(相對標準偏差=O．9％)，測得純化后

4、的血漿白蛋白為33205+1618M-1cm-1(相對偏差=5．7％)。說明經二維色譜純化獲得的的白蛋白純度較高。隨后的白蛋白氨基酸組成分析證明，同正常人相比，尿毒癥病人水解出的17種白蛋白氨基酸組成大部分要低10％左右，其中胱氨酸和精氨酸在二組間有顯著性統計差異(正常人～尿毒癥病人：精氨酸：2．16士O．13vs．1．87土0．17，p<0．05；胱氨酸：0．284-0．06vs．0．17+0．02，p<0．05)。結論尿毒癥患者中氨