發(fā)酵法生產(chǎn)十五碳二元酸.pdf

1、麝香是藥中珍品，又是一種極為重要的香料。天然麝香量少價(jià)高，主要成分為3-甲基環(huán)十五酮(人工麝香)，以十五碳二元酸(DCA15)為原料通過(guò)化學(xué)合成可得到人工麝香，得率高、成本相對(duì)較低，可大量生產(chǎn)，并可替代天然麝香。因此研究開發(fā)高純度DCA15的發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)具有現(xiàn)實(shí)意義。 本論文對(duì)DCA15生產(chǎn)菌株——熱帶假絲酵母(Candidatropicalis)進(jìn)行了選育，研究其搖瓶發(fā)酵條件和發(fā)酵技術(shù)，通過(guò)代謝調(diào)控，進(jìn)一步強(qiáng)化α,ω氧化能力、

2、弱化β氧化能力，并對(duì)DCA15提取純化工藝進(jìn)行研究。 以C.tropicalis072為出發(fā)菌株，經(jīng)紫外線、亞硝酸誘變和氯丙嗪平板篩選，篩選得到一株遺傳特性穩(wěn)定的DCA15生產(chǎn)菌株Ctropicalis410，DCA15產(chǎn)量達(dá)17.50g/L，烷烴轉(zhuǎn)化率達(dá)29.63％，DCA15產(chǎn)量和烷烴轉(zhuǎn)化率均比出發(fā)菌株提高45％。 對(duì)Ctropicalis410生產(chǎn)DCA15的搖瓶發(fā)酵條件及發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。確定其搖瓶發(fā)酵條件：擋

3、板三角瓶(250mL)，裝液量25mL/250mL，轉(zhuǎn)速180r/min，接種量8％(v/v)。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，利用均勻設(shè)計(jì)法，并借助MATLAB7.1對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得到發(fā)酵培養(yǎng)基：尿素0.5g/L、乙酸鈉3.7g/L、KH2PO49.1g/L、酵母膏1g/L、玉米漿粉1g/L、NaCl1g/L。在此優(yōu)化條件下，DCA15產(chǎn)量達(dá)29.32g/L，比初始條件下提高了67.5％；轉(zhuǎn)化率達(dá)35.46％，比初始條件下提高16.44％。

4、 對(duì)C.tropicalis410生產(chǎn)DCA15進(jìn)行代謝調(diào)控?？疾歃?ω氧化促進(jìn)劑、β氧化抑制劑對(duì)發(fā)酵的影響，初步探索生長(zhǎng)代謝與產(chǎn)物合成代謝的關(guān)系。最后確定，12h添加0.5g/Lα,ω氧化促進(jìn)劑——苯巴比妥，24h添加2g/Lβ氧化抑制劑——丙烯酸，48h添加10g/L蔗糖，DCA15產(chǎn)量達(dá)38.82g/L，比初始條件下提高32.40％，轉(zhuǎn)化率達(dá)41.08％，比初始條件下提高15.80％。并在7L罐上確定pH梯度上升調(diào)控策略，