亞麻木酚素的提取及對糖尿病小鼠腎臟保護作用研究.pdf

1、木酚素(lignan)是存在于可食植物中的一種植物化學(xué)物質(zhì)，結(jié)構(gòu)上屬于多酚類化合物，木酚素的化學(xué)結(jié)構(gòu)與雌激素十分相似，能與雌激素受體相結(jié)合而表現(xiàn)為雌激素活性或抗雌激素活性。研究表明它除對內(nèi)源性激素的代謝起作用外，同時具有一定的抗氧化活性，可以預(yù)防某些腫瘤(如前列腺癌與乳腺癌)、心血管疾病及糖尿病的發(fā)生。亞麻木酚素是從亞麻籽中分離出來的植物木酚素，國外文獻報道亞麻木酚素可以預(yù)防1型、2型糖尿病。但國內(nèi)關(guān)于亞麻木酚素的生物活性及其對糖尿病的

2、防治作用尚未見報道。本課題在建立亞麻籽木酚素測定方法的前提下，對脫脂亞麻籽進行木酚素類化合物的提取，并進行了亞麻木酚素提取物對糖尿病小鼠腎臟保護作用的初步研究，以便為尋找天然植物藥物及開發(fā)保健品提供實驗依據(jù)。 第一部分HPLC法測定亞麻籽中亞麻木酚素的含量，為建立亞麻籽中亞麻木酚素(以開環(huán)異落葉松脂素計)含量測定的高效液相色譜(HPLC)分離分析法。采用正交試驗觀察甲醇濃度、鹽酸酸水解溫度、時間、濃度對提取開環(huán)異落葉松脂素的影響

3、。結(jié)果：最佳提取開環(huán)異落葉松脂素(SECO)的溶劑系統(tǒng)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90％的甲醇，鹽酸酸水解溫度、時間、濃度分別為90℃、1h、3.5mol/L。HPLC法測定SECO的線性范圍在14.8～74μg/ml，相關(guān)系數(shù)為0.9998。亞麻籽中開環(huán)異落葉松脂素的含量為1.56mg/g，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.47％，低濃度加標(biāo)平均回收率為92.7％，高濃度加標(biāo)平均回收率為98.9％。結(jié)果提示此法簡單快速，是測定亞麻籽中亞麻木酚素的有效方法。

4、第二部分亞麻木酚素提取工藝的研究通過對不同提取條件的優(yōu)化，確定從亞麻籽中提取木酚素的方法。分別采用乙醇加熱回流提取、乙醇超聲提取、甲醇加熱回流提取、甲醇超聲提取等不同方法提取亞麻籽中木酚素；通過C<,18>柱進行純化，并對精制產(chǎn)品進行分析鑒定。結(jié)果：乙醇超聲提取法優(yōu)于其它法；精制產(chǎn)品中SECO含量為20.1g/100g。結(jié)果提示乙醇超聲提取后采用C<,18>柱分離可有效獲得亞麻木酚素。 第三部分亞麻木酚素提取物對糖尿病小鼠腎臟的

5、保護作用，在對亞麻木酚素進行提取的基礎(chǔ)上，觀察亞麻木酚素提取物對糖尿病小鼠早期腎損傷的影響并探討其作用機制。雄性ICR小鼠分六組：正常對照組；糖尿病模型對照組；糖尿病模型亞麻木酚素提取物[600mg/(kg·d)、1.2g/(kg·d)、3.6g/(kg·d)]治療組；糖尿病小鼠鹽酸二甲雙胍[100m g/(kg·d)]治療組。連續(xù)灌胃8周，實驗?zāi)┍容^各組體重、腎重、腎重/體重、24 h尿白蛋白排泄率、腎組織M D A含量及腎組織S O

6、 D、G S H-P X活性。HE染色分析腎小球病理形態(tài)學(xué)改變。綜合評價亞麻木酚素提取物對腎臟的保護作用。結(jié)果：與糖尿病模型對照組比較，亞麻木酚素提取物中、高劑量組降低腎重、24 h尿白蛋白排泄率(P<0.05)，且提高腎臟組織SOD、GSH-Px活性，降低MDA含量。結(jié)果認(rèn)為亞麻木酚素提取物能減輕糖尿病小鼠腎臟損傷，對腎臟有積極的保護作用。其機制與其減輕腎臟氧化應(yīng)激有關(guān)。第四部分亞麻木酚素提取物急性毒性實驗研究觀察亞麻木酚素提取物對小

7、鼠的急性毒性反應(yīng)，為擬定臨床安全劑量提供依據(jù)。采用急性毒性實驗霍恩氏法，給ICR小鼠灌胃給藥，連續(xù)14d觀察小鼠行為活動等指標(biāo)和毒性反應(yīng)程度，并在實驗結(jié)束時處死小鼠進行剖檢，以獲得初步毒性資料。結(jié)果：雌雄小鼠急性經(jīng)口LD<,50>值大于21.5g/kg BW；14d內(nèi)各組小鼠均健康存活，未見明顯中毒癥狀。提取物對小鼠的體重增長和食物利用率無不良影響；臟器系數(shù)均無不良影響；肉眼觀察解剖的臟器，各標(biāo)本表面及切面未見異常改變，各臟器病理檢查無