因?qū)幤募毙远拘院烷L期毒性實驗及甲亢性肝損害的臨床因素分析.pdf

1、研究背景:
　　 甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)癥（Hyperthyroidism，簡稱甲亢）是由多種原因引起的體內(nèi)甲狀腺分泌激素過多所致的機(jī)體神經(jīng)、心血管、消化等系統(tǒng)興奮性增高和代謝亢進(jìn)為主要表現(xiàn)的一組內(nèi)分泌疾病的總稱。常見臨床癥狀為多食易饑、體重減輕、乏力、心悸、心動過速、怕熱、急躁、易激動，甲狀腺常為彌漫性、對稱性輕度至中度腫大，不少彌漫性甲狀腺腫大患者常伴有不同程度的突眼癥，重癥患者未經(jīng)適當(dāng)治療，又因感染、手術(shù)等各種應(yīng)激而誘發(fā)甲狀腺危象

2、[1]。甲亢病因較為復(fù)雜，其確切發(fā)病機(jī)制尚未明確。中醫(yī)將本病歸于“癭、癭氣”范疇。一般認(rèn)為其發(fā)病原因首先在于患者素體陰虧，腎陰不足，陰虛陽亢，加上情志失調(diào)，變生陰虛火旺、氣陰兩虛、痰濕阻滯等病機(jī)，其病位涉及肝、腎、心、脾、肺，而以肝腎為主[2]。甲亢常累及全身多系統(tǒng)、多器官，其中常見而又往往易被忽視的是肝臟損害。甲亢性肝損害的發(fā)病率高達(dá)37％～76.7％，相當(dāng)多的甲亢患者伴有肝臟損害，引起肝功能異常、肝腫大，黃疸等。
　　 目前

3、國內(nèi)外西醫(yī)治療本病:以抗甲狀腺藥物、放射性131I、手術(shù)切除等療法為主，均不能糾正免疫功能紊亂，都存在一定的局限性和不同的副作用。西藥抗甲亢藥物治療雖有效，但療程較長，停藥后復(fù)發(fā)率高達(dá)50％～80％，甲狀腺腫、突眼等癥狀不易控制，而且副作用較大，患者可出現(xiàn)過敏反應(yīng)（如皮膚瘙癢、皮疹、發(fā)熱等，約占1％～5％）、骨髓影響（白細(xì)胞減少、血小板減少、貧血等，1％左右）[6]及肝功能損害、關(guān)節(jié)痛、水腫、脫發(fā)等。手術(shù)治療有一定的適應(yīng)癥和禁忌癥，且易

4、損傷甲狀旁腺和喉返神經(jīng)[7]。近10年來中醫(yī)藥治療甲亢取得可喜的進(jìn)展，辨證分型、治療手段靈活多樣，療效肯定，尤其對因白細(xì)胞減少或肝損害而不能耐受西藥治療者，中藥治療更突顯了其獨有的優(yōu)勢與特色。
　　 因?qū)幤瑸閺V州南方醫(yī)院臨床經(jīng)驗方，它是以中醫(yī)理論為依據(jù)，借助現(xiàn)代科技，從藥理學(xué)、病理學(xué)等多學(xué)科角度入手，篩選了上百種中草藥，最終由黃芪、昆明山海棠、鱉甲、當(dāng)歸、生地、甘草等九味中藥科學(xué)配伍研制而成，諸藥相和，共奏養(yǎng)陰軟堅，解毒散結(jié)之功

5、。經(jīng)臨床觀察表明:因?qū)幤瑢﹃幪撔?、痰濕型、血瘀型甲亢均具有較好的臨床療效，可以有效消除甲亢癥狀，快速修復(fù)機(jī)體各個系統(tǒng)的正常功能，全面提高自身的免疫功能，達(dá)到標(biāo)本兼治的目的。而且初步試驗顯示:因?qū)幤瑢Ω闻K具有保護(hù)作用，避免了甲亢本身以及抗甲狀腺藥物引起的肝損害，填補(bǔ)了抗甲亢藥物防肝損害治療的用藥空白。
　　 本課題將結(jié)合毒理學(xué)、藥理學(xué)、動物實驗方法學(xué)和生物統(tǒng)計學(xué)等學(xué)科的研究方法和技術(shù)，進(jìn)行因?qū)幤募毙远拘院烷L期毒性實驗研究，并通過

6、回顧性分析臨床甲亢病歷資料，對甲亢性肝損害的臨床相關(guān)因素進(jìn)行分析，最終為因?qū)幤男滤幯邪l(fā)和臨床甲亢的治療提供實驗依據(jù)。
　　 目的:
　　 通過急性毒性實驗，考察因?qū)幤瑢π∈蟮募毙远拘?，測出半數(shù)致死量(LD50)或最大耐受量(MTD);通過長期毒性實驗，考察因?qū)幤瑢Υ笫蟮拈L期毒性，觀察因?qū)幤诜辔负髣游锍霈F(xiàn)的毒性反應(yīng)及蓄積中毒的癥狀和靶器官;對因?qū)幤拘苑磻?yīng)的危害程度進(jìn)行安全性評價，為擬開發(fā)因?qū)幤蔀榭辜卓盒滤幎峁┡R

7、床用藥劑量的安全范圍;對甲亢性肝損害的臨床因素進(jìn)行分析，為甲亢性肝損害的診治提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.因?qū)幤募毙远拘詫嶒?br>　　 40只KM小鼠按編號及體重分層數(shù)字隨機(jī)分為2組，即空白對照組、因?qū)幤M(32g·kg-1)，每組20只，雌雄各半，24h內(nèi)2次灌胃給予純凈水及因?qū)幤幰海?次給藥間隔為6h。給藥間隔期間連續(xù)觀察小鼠的反應(yīng)，之后每天上下午各觀察1次，給藥后連續(xù)觀察14d，每天記錄動物的一般狀況

8、，包括外觀、行為、分泌物、排泄物、死亡情況及中毒反應(yīng)（中毒反應(yīng)的癥狀、嚴(yán)重程度、起始時間、持續(xù)時間、是否可逆）等，并記錄體重和攝食量，實驗結(jié)束后大體解剖小鼠，肉眼觀察各臟器的病變情況。
　　 2.因?qū)幤拈L期毒性實驗
　　 將48只SD大鼠按長期毒性實驗分組方法隨機(jī)分為4組，即空白對照組、因?qū)幤蛣┝拷M(0.6g·kg-1)、中劑量組(3g·kg-1)、高劑量組（6g·kg-1），每組12只，雌雄各半，各給藥組分別相當(dāng)于

9、臨床人日用劑量(0.06g·kg-1)的10倍、50倍和100倍;空白對照組給予等體積的純凈水。連續(xù)灌胃30d，給藥期間大鼠自由攝食和飲水。每天觀察記錄大鼠的一般狀況如進(jìn)食、行為活動、糞便等。每周稱體重和攝食量，并根據(jù)體重變化及時調(diào)整給藥劑量。第30d給藥24h后，用3％戊巴比妥鈉溶液麻醉大鼠，腹主動脈采血，采集的血樣于血細(xì)胞分析儀上檢測紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)、血紅蛋白(HGB)、血小板(PLT)、淋巴細(xì)胞(LY)等血液學(xué)指

10、標(biāo)。另外取血分離血清，于生化自動分析儀上測定血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、膽紅素(BIL)、總蛋白(TP)等生化學(xué)指標(biāo)。并對主要臟器進(jìn)行全面尸檢，取腦、心、肝、脾、肺、腎等臟器稱重，計算臟器系數(shù)。并對上述主要臟器及胃、小腸、子宮、腦等用10％甲醛固定，進(jìn)行常規(guī)病理學(xué)檢查。
　　 3.甲亢性肝損害的臨床因素分析
　　 回顧性分析我院2008年至2010年期間的甲亢病例，根據(jù)甲亢性肝損害的診斷標(biāo)準(zhǔn)，將甲

11、亢患者分為單純性甲亢組和甲亢性肝損害組，甲亢性肝損害的診斷標(biāo)準(zhǔn)為:具備以下四項者，甲亢性肝損害成立:(1)根據(jù)典型的臨床癥狀、體征及甲狀腺功能檢查以明確甲亢診斷。(2)肝功能檢查具備下列一項或以上者:①ALT及AST升高;②堿性磷酸酶(AKP)升高;③γ-轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)升高;④總膽紅素(TB)或（和）直接膽紅素(DB)升高;⑤TP或（和）白蛋白(ALB)下降;⑥肝腫大。(3)排除其他原因所致的肝功能損害及肝腫大。(4)甲亢控制后，肝

12、功能及肝腫大恢復(fù)正常。對兩組患者的年齡、性別、病程、肝功能及甲狀腺激素水平進(jìn)行測定，從而對甲亢性肝損害的臨床因素進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.因?qū)幤瑢π∈蟮募毙远拘?br>　　 給藥間隔期間和14d觀察期內(nèi)，各組小鼠精神和自主行為活動狀況良好、皮膚被毛清潔、大小便正常，亦未見其他毒性反應(yīng)癥狀。根據(jù)因?qū)幤鞈乙旱淖畲鬂舛?0.4g·mL-1)和小鼠的最大灌胃體積（40mL·kg-1），得出MTD為32g·kg-1，

13、相當(dāng)于臨床人日用劑量(0.06g·kg-1)的534倍。因?qū)幤瑢π∈蟮捏w重和攝食量均無影響。給藥第14d結(jié)束24h后大體解剖小鼠，肉眼觀察各臟器，心、肝、脾、肺、腎等均無異常。
　　 2.因?qū)幤瑢Υ笫蟮拈L期毒性
　　 給藥期間，因?qū)幤鲃┝拷M大鼠的外觀體征、行為活動、進(jìn)食量及糞便等狀況均正常，除一只大鼠死亡以外，其他的大鼠無一死亡。因?qū)幤瑢Υ笫蟮捏w重、攝食量、臟器系數(shù)均無影響。給藥組的少數(shù)血液學(xué)指標(biāo)和血液生化指標(biāo)與空白對

14、照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。第30d灌胃給藥24h后，處死各組大鼠，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等臟器，外形、體積、色澤均正常，無充血、腫脹、壞死等異?，F(xiàn)象。各臟器用10％甲醛固定48h后，按常規(guī)方法做病理切片，光鏡下觀察，因?qū)幤鲃┝拷M大鼠的心、肝、脾、肺、腎等臟器與空白對照組比較，均未見異常。
　　 3.甲亢性肝損害的臨床因素分析
　　 甲亢性肝損害的發(fā)生率為58.0％;甲亢性肝損害與性別無關(guān)(P=0.

15、995);甲亢性肝損害與年齡無關(guān)(P=0.994);甲亢性肝損害組的ALT、AST、TB、DB、IB、球蛋白(G)顯著高于單純性甲亢組(P＜0.05)，而TP、ALB顯著低于單純性甲亢組（P＜0.05），A/G差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.403）;甲亢性肝損害組的三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)顯著高于單純性甲亢組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.急性毒性實驗:因?qū)幤瑢π∈蟮募毙远拘暂^輕，對小鼠的外觀體

16、征、行為活動無影響。所以不能測出LD50，得出MTD為32g·kg-1。初步推斷臨床用藥安全。
　　 2.長期毒性實驗:因?qū)幤?.6g·kg-1、3g·kg-1、6g·kg-1）劑量組對大鼠灌胃給藥30d的長期毒性實驗觀察所見:與空白對照組比較，因?qū)幤鲃┝拷M對受試大鼠的一般生理活動無影響，自主性行為、攝食量、體重增長等均正常;各重要臟器組織形態(tài)和組織病理切片鏡檢顯示正常，未見有藥物蓄積造成的明顯毒性反應(yīng)的靶器官存在;但血液學(xué)