Notch1-Hes信號通路在強直性脊柱炎髖關(guān)節(jié)韌帶中的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、研究背景:
　　 強直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)發(fā)病率在炎癥性關(guān)節(jié)炎中占第二位，其發(fā)病機制仍不清楚。由于其好發(fā)于中青年男性，具有較高的致殘、致畸率，目前已成為國內(nèi)外人口與健康研究領(lǐng)域的重點。AS的標志性病理特征與其它類風濕關(guān)節(jié)炎類疾病不同，后者主要表現(xiàn)為軟骨與骨的侵蝕性破壞。而AS則主要表現(xiàn)為病理性新骨形成的骨化過程，表現(xiàn)為在新生骨小梁里伴隨著新的軟骨生成和微血管的持續(xù)性形成，纖維組織也在生成

2、，從而導致異常骨化，最終導致關(guān)節(jié)強直，這是AS致殘的主要原因。另外，研究表明AS的骨化作用和炎癥反應(yīng)，是有著不同的發(fā)病機理，是相對獨立的的兩個過程。即使成功地阻斷這類患者的炎癥過程，也不能停止關(guān)節(jié)強直的進程。Notch1基因既可以維持干細胞處于未分化狀態(tài)，也可以調(diào)節(jié)干細胞向成骨細胞的分化。一旦定向分化為成骨細胞，Notch1信號又可促進成骨細胞增生，并抑制成骨細胞成熟。因此，探討Notch1-Hes信號通路在AS骨化發(fā)生過程中的作用，具

3、有重要的基礎(chǔ)研究價值和潛在的臨床意義。
　　 研究目的:
　　 利用先進的Affymetrix全系統(tǒng)芯片技術(shù)，對AS患者髖關(guān)節(jié)韌帶與正常髖關(guān)節(jié)韌帶進行篩選，獲得基因芯片表達譜數(shù)據(jù)。結(jié)合國內(nèi)外檢索文獻，選擇最為可能的骨化基因，進行從基因、蛋白到組織樣本切片的驗證。同時與臨床數(shù)據(jù)進行相關(guān)性研究分析，探討其與AS韌帶骨化病程的關(guān)系。
　　 研究方法:
　　 以2010-2012年在長海醫(yī)院骨科就診行人工髖關(guān)節(jié)置

4、換術(shù)的3例AS患者作為病例組研究對象，所有患者均符合84年強直性脊柱炎紐約修訂的診斷標準，另外選取3例股骨頸骨折在長海醫(yī)院骨科行人工髖關(guān)節(jié)置換術(shù)患者（排除其他各種骨關(guān)節(jié)疾?。┳鳛檎φ战M。利用Affymetrix全系統(tǒng)芯片技術(shù)進行差異基因的篩選。根據(jù)篩選結(jié)果，結(jié)合相關(guān)文獻，選取候選骨化基因進行實時熒光定量PCR進行驗證、Western Blot技術(shù)驗證相關(guān)蛋白，免疫組化技術(shù)驗證蛋白表達情況。擴大樣本（22例AS患者，診斷標準同上），運

5、用免疫組化技術(shù)檢測髖關(guān)節(jié)樣本中候選基因的表達情況，并與AS患者的臨床數(shù)據(jù)進行相關(guān)性分析。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.按照差異倍數(shù)1.5倍分析，AS組與與正常對照組的基因芯片結(jié)果顯示，下調(diào)基因652個，上調(diào)基因966個。差異變化的功能基因涉及多種信號通路，其中Notch1基因上調(diào)1.53倍;Hes基因上調(diào)1.75倍。
　　 2.在擴大的樣本中，實時熒光定量PCR顯示，Notch1基因、Hes基因在病例組的表達較正

6、常對照組有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。Western Bolt結(jié)果顯示Notch1蛋白在AS患者組表達明顯高于正常對照組。
　　 3.在免疫組化切片中，Notch1蛋白與Hes蛋白主要表達于韌帶組織的周緣與中央靠血管處。AS組兩個蛋白表達陽性率均明顯高于對照組(P＜0.05)。其中Hes蛋白表達陽性率與AS患者的病程呈正相關(guān)(r=0.594，P＜0.01)。
　　 研究結(jié)論:
　　 1.AS患者髖關(guān)節(jié)韌帶組織與正