中國漢族人群多發(fā)性硬化關(guān)聯(lián)基因的篩選及FCRL3基因多態(tài)與多發(fā)性硬化相關(guān)性的研究.pdf

1、第一部分：
　　目的：
　　多發(fā)性硬化(MS)與視神經(jīng)脊髓炎(NMO)是常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘性疾病。目前全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS),除人白細胞抗原(HLA)基因外,還發(fā)現(xiàn)許多非HLA基因與MS相關(guān)。本研究基于國外人群MS的GWAS結(jié)果,在中國漢族人群中篩選MS的非HLA關(guān)聯(lián)基因。
　　方法：
　　收集2007-2012年復旦大學附屬華山醫(yī)院和福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院門診及住院確診的MS患者154例和NMO患

2、者109例以及對照301例。采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOFMS),對病例組及對照組標本的71個單核苷酸多態(tài)性(SNPs)進行分型。
　　結(jié)果：
　　1、MS組與對照組比較,僅有7個SNP位點的基因頻率分布存在顯著統(tǒng)計學差異:rs11129295/EOMES(P=0.008,OR=1.559),rs2293370/TMEM39A(P=0.018,OR=0.695),rs703842/CYP27B1

3、(P=0.036,OR=1.354),rs7522061/FCRL3(P=0.0003,OR=0.593),rs3761959/FCRL3(P=0.0005,OR=0.601),rs7528684/FCRL3(P=0.0007,OR=0.616),rs10466829/CLECL1(P=0.026,OR=0.724);
　　2、NMO組與對照組比較,僅有6個SNP位點的基因頻率分布存在顯著統(tǒng)計學差異:rs1800693/TNFRS

4、F1A(P=0.032,OR=1.574),rs7522061/FCRL3(P=0.009,OR=0.658),rs3761959/FCRL3(P=0.014,OR=0.678),rs7528684/FCRL3(P=0.026,OR=0.701),rs6937876/ATG5(P=0.023,OR=1.449),rs763361/CD226(P=0.036,OR=1.404)。
　　結(jié)論：
　　1、來自高加索人群MS的GWA

5、S結(jié)果大部分不適用中國漢族人群MS;
　　2、FCRL3基因是中國漢族人群中與MS關(guān)聯(lián)性最強的易感基因;
　　3、FCRL3基因與中國漢族人群MS和NMO均具有相關(guān)性。
　　第二部分：
　　目的：
　　在前部分中,我們研究發(fā)現(xiàn)FCRL3基因與中國漢族人群MS和NMO相關(guān)聯(lián)。在這部分,我們將進一步探討FCRL3基因與MS和NMO表型的關(guān)系,特別是與寡克隆帶(OCB)和AQP4抗體(AQP4-ab)兩種抗體之間

6、的關(guān)系;初步探討FCRL3基因在MS發(fā)病過程中的可能機制。
　　方法：
　　采用等電點聚焦技術(shù)檢測OCB;采用免疫熒光技術(shù)檢測AQP4-ab。收集MS患者34例和對照41例的外周血單核細胞RNA標本,采用實時定量PCR技術(shù)檢測標本中FCRL3基因mRNA相對表達水平。
　　結(jié)果：
　　1、FCRL3基因的4個SNP位點中,rs7528684位點與rs376195位點及rs7522061位點呈強連鎖關(guān)系,而rs11

7、264799位點與前述3個SNP位點呈弱連鎖關(guān)系(平均R2=0.41)。
　　2、邏輯回歸分析結(jié)果:在顯性模型中,rs7528684位點的C等位基因為MS組的保護因素(CT+CCvsTT,p=0.002,OR=0.528),而rs11264799位點的A等位基因為NMO的保護因素(AG+AAvsGG,p=0.005,OR=0.492)。
　　3、TG單倍體型(rs7528684和rs11264799)為MS的風險因素(p=0

8、.003,OR=1.534),而CG單倍體型為MS組的保護因素(p=0.012,OR=0.613);TG單倍體型為NMO組的風險因素(p=0.012,OR=1.509),而CA單倍體型為NMO組的保護因素(p=0.015,OR=0.617)。
　　4、rs7528684位點和rs11264799位點與MS患者起病時間(AAO)和疾病嚴重程度(EDSS)無關(guān),也與NMO患者起病時間(AAO)無關(guān)。
　　5、在MS組中,依據(jù)0C

9、B狀態(tài)分層,rs7528684位點的基因型在陰陽性組中存在明顯的統(tǒng)計學差異(p=0.002),rs7528684位點的C等位基因與0CB的出現(xiàn)呈負相關(guān)(p=1.488×10-4,OR=0.354);rs7528684位點的C等位基因為0CB陽性的MS患者保護因素(p=5.650×10-6,OR=0.392),而與0CB陰性的MS患者無相關(guān)性(p=0.636)。在NMO組中,依據(jù)AQP4-ab狀態(tài)分層,rs11264799位點的基因型在陰

10、陽性組中無明顯的統(tǒng)計學差異(p=0.383);rs11264799位點與AQP4-ab的出現(xiàn)無相關(guān)性(p=0.214)。
　　6、在對照組中,不同基因型FCRL3基因mRNA表達存在明顯的統(tǒng)計學差異,CC基因型較其他基因型明顯增高(CCvsTT,p=0.021;CCvsCT,p=0.025);在MS組中,不同基因型FCRL3基因mRNA表達存在明顯的統(tǒng)計學差異(CCvsTT,p=0.013;CCvsCT,p=0.045)。對于相同

11、基因型CC,MS組的FCRL3基因mRNA表達明顯高于對照組(p=2.481×10-4);對于相同基因型CT,MS組的FCRL3基因mRNA表達明顯高于對照組(p=1.982×10-5);對于相同基因型TT,MS組的FCRL3基因mRNA表達明顯高于對照組(p=0.029)。
　　結(jié)論：
　　1、在中國漢族MS患者中,FCRL3基因rs7528684位點的C等位基因與OCB的出現(xiàn)呈負相關(guān)。在中國漢族NMO患者中,FCRL3基