二甲酸鉀對斷奶仔豬胃功能及相關(guān)功能基因表達的影響.pdf

1、本研究旨在探討二甲酸鉀(Potassium diformate，KDF)對斷奶仔豬胃酸分泌及胃功能的影響及其作用機制。本試驗選取28日齡斷奶、體重為5～7kg仔豬（長×大）270頭，按照公母比例一致的原則隨機分為3組，每組6個重復，每個重復15頭仔豬。以不添加任何抗生素和酸化劑的基礎(chǔ)日糧為陰性對照，以基礎(chǔ)日糧添加復合抗生素(硫酸粘桿菌素16.6mg/kg，吉他霉素45mg/kg，喹乙醇83mg/kg)的為陽性對照，以基礎(chǔ)日糧添加1％ K

2、DF為試驗組。分別通過短期（2周）和長期（5周）飼養(yǎng)試驗研究KDF和抗生素對斷奶仔豬胃功能及相關(guān)功能基因表達的影響。在此基礎(chǔ)上，通過胃底粘膜的原代細胞培養(yǎng)，研究KDF對胃功能基因表達的影響。
　　1.KDF短期處理對斷奶仔豬胃功能及功能基因表達的影響
　　1.1 胃酸及胃蛋白酶活性
　　KDF組與基礎(chǔ)日糧組相比，斷奶仔豬持續(xù)2周采食含1％ KDF的日糧對仔豬的胃重及胃相對重量沒有顯著影響，對胃食糜中鹽酸(HCl)濃度、

3、乳酸濃度、總酸含量、pH值和胃粘膜中的胃蛋白酶活性沒有顯著影響;KDF組與抗生素組相比，兩組的胃重、胃相對重量、胃食糜中HCl濃度、乳酸濃度、總酸含量、食糜pH值、胃粘膜中的胃蛋白酶活性無顯著差異;抗生素組與基礎(chǔ)日糧組相比，兩組仔豬胃重、胃相對重量、胃食糜pH值、HCl、總酸含量，以及胃粘膜中的胃蛋白酶活性無顯著差異，但抗生素組食糜中乳酸的含量顯著高于基礎(chǔ)日糧組(P=0.045)。
　　1.2 功能基因表達
　　KDF組與基

4、礎(chǔ)日糧組相比，KDF組胃底粘膜組織中生長抑素(Somatostatin，SS)mRNA、生長素(ghrelin) mRNA、膽囊收縮素(Cholecystokinin，CCK) mRNA相對表達量顯著低于基礎(chǔ)日糧組(P=0.005，P＜0.001，P＜0.001);H+-K+-ATPase mRNA相對表達量顯著高于基礎(chǔ)日糧組(P=0.002)。胃底粘膜組織中胃泌素(gsatrin) mRNA相對表達量兩組之間無顯著差異;KDF組與抗生

5、素組相比，KDF組胃底粘膜中SS和ghrelin mRNA表達顯著低于抗生素組(P=0.013，P=0.045)，兩組胃底粘膜gastrin，CCK和H+-K+-ATPase mRNA的表達無顯著差異;抗生素組與基礎(chǔ)日糧組相比，胃底粘膜組織中g(shù)astrin、ghrelin和CCK mRNA相對表達量顯著低于基礎(chǔ)日糧組（P=0.006，P=0.019，P＜0.001)，H+-K+-ATPase mRNA相對表達量顯著高于基礎(chǔ)日糧組(P=0

6、.006)，但兩組胃底粘膜中的SS mRNA無顯著差異。仔豬胃粘膜中H+-K+-ATPase活性、gastrin和SS含量無顯著的組間差異。
　　2.KDF長期處理對斷奶仔豬胃功能及功能基因表達的影響
　　2.1 胃酸及胃蛋白酶活性
　　KDF組與基礎(chǔ)日糧組相比，斷奶仔豬持續(xù)5周采食含10gkgKDF的日糧，對仔豬的胃重和胃食糜中總酸濃度無顯著影響，但顯著降低胃相對重量、胃食糜中HCl濃度和胃粘膜中的胃蛋白酶活性(P=

7、0.050，P=0.016，P=0.001)，顯著升高胃食糜pH值和乳酸含量(P=0.018，P=0.001);KDF組與抗生素組相比，KDF組斷奶仔豬的胃重和胃食糜中乳酸含量顯著高于抗生素組(P＜0.001，P=0.006)，KDF組胃相對重量、胃食糜中HCl濃度、總酸含量，以及胃食糜pH值、胃粘膜中的胃蛋白酶活性與抗生素組之間無顯著差異;抗生素組與基礎(chǔ)日糧組相比，抗生素組仔豬胃重、胃相對重、胃蛋白酶活性、胃液HCl濃度都顯著低于基礎(chǔ)

8、日糧組(P=0.004，P=0.016，P＜0.001，P=0.012)，而胃食糜pH值、乳酸、總酸濃度與基礎(chǔ)日糧組相比沒有顯著差異。
　　2.2 基因表達
　　KDF組與基礎(chǔ)日糧組相比，胃底粘膜gsatrin、H+-K+-ATPase mRNA相對表達量顯著升高(P＜0.001，P=0.005)，SS和CCK mRNA顯著下降(P=0.009，P=0.001)，ghrelin mRNA無顯著變化;KDF組與抗生素組相比，K

9、DF組胃底粘膜SS、CCK和ghrelin mRNA的表達顯著低于抗生素組(P=0.003，P=0.002，P=0.002)，但gastrin和H+-K+-ATPase mRNA表達兩組之間無顯著差異;抗生素組和基礎(chǔ)日糧組相比，胃底粘膜組織中g(shù)hrelin、gastrin和H+-K+-ATPase mRNA相對表達量顯著高于基礎(chǔ)日糧組(P=0.002，P＜0.001，P=0.005)，SS和CCK mRNA相對表達量和基礎(chǔ)日糧組相比沒有

10、顯著差異。
　　2.3 胃底粘膜中H+-K+-ATPase活性、gastrin和SS的含量
　　KDF組與基礎(chǔ)日糧組相比，仔豬胃粘膜中H+-K+-ATPase活性、gastrin蛋白濃度沒有顯著差異;但KDF顯著提高了胃粘膜中SS的濃度(P=0.009)。KDF組與抗生素組相比，仔豬胃粘膜中H+-K+-ATPase活性、gastrin和SS含量沒有顯著差異?？股亟M與基礎(chǔ)日糧組相比，仔豬胃粘膜中g(shù)astrin和SS含量都沒有

11、顯著差異，但是抗生素顯著降低了胃粘膜中H+-K+-ATPase活性（P=0.049）。
　　3.體外試驗分析KDF對仔豬胃功能基因表達的影響
　　仔豬胃粘膜上皮細胞經(jīng)含0、0.1、1.0和10 mg/ml KDF無血清培養(yǎng)4小時后收集細胞提取RNA，用相對定量RT-PCR法分析細胞中SS、gastrin、ghrelin、H+-K+-ATPase和GPR43 mRNA的相對表達量。實驗通過5頭豬的重復試驗表明，1 mg/ml

12、KDF顯著提高胃粘膜上皮細胞gastrin(P=0.042)和GPR43 mRNA相對表達(P=0.049)，10 mg/ml KDF顯著提高了SS mRNA水平(P=0.009)和H+-K+-ATPase mRNA(P=0.028)相對表達量，而0.1～10 mg/ml KDF對胃粘膜上皮細胞的ghrelin mRNA相對表達量無顯著影響。
　　總結(jié):(1)斷奶仔豬日糧中添加KDF和混合抗生素添加劑均影響仔豬胃的發(fā)育和功能基因表