細(xì)菌基序及部分色素調(diào)節(jié)劑對(duì)黑素細(xì)胞的影響.pdf

1、1學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究工作所取得的成果，本論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或已經(jīng)獲取得的研究成果。在本論文撰寫中所引用其他研究者的研究?jī)?nèi)容和成果時(shí)已在論文中給予特別標(biāo)注和明確說明。對(duì)本論文的實(shí)驗(yàn)研究過程中給予幫助的其他人士，以及論文撰寫中所提供的建議等的貢獻(xiàn)也已作了致謝說明。本人完全理解本聲明的法律責(zé)任，以及所涉及的結(jié)果將由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日關(guān)于學(xué)位論文著作權(quán)

2、共享聲明根據(jù)《中華人民共和國(guó)著作權(quán)法》和《高等院校知識(shí)產(chǎn)權(quán)管理?xiàng)l例》，本學(xué)位論文，題目：細(xì)菌基序及部分色素調(diào)節(jié)劑對(duì)黑素細(xì)胞的影響細(xì)菌基序及部分色素調(diào)節(jié)劑對(duì)黑素細(xì)胞的影響，是研究生在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的職務(wù)作品，得到蚌埠醫(yī)學(xué)院相關(guān)部門科室的物質(zhì)技術(shù)和經(jīng)費(fèi)支持，因此，本學(xué)位論文的著作權(quán)由研究生，導(dǎo)師和蚌埠醫(yī)學(xué)院三方共同享有，均享有署名權(quán)和使用權(quán)等權(quán)益；本學(xué)位論文成果歸屬蚌埠醫(yī)學(xué)院。根據(jù)國(guó)家學(xué)位授予條例，學(xué)校對(duì)本學(xué)位論文有使用權(quán)，包括保存本學(xué)位論

3、文；因教學(xué)和科研的目的，保留在圖書館被查閱或借閱；學(xué)?？筛鶕?jù)國(guó)家規(guī)定將本學(xué)位論文送交國(guó)家有部門保留和使用。學(xué)校在公布本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容時(shí)，應(yīng)保障研究生和導(dǎo)師的署名權(quán)等權(quán)益。研究生和導(dǎo)師在公開發(fā)表本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容時(shí)必須保障學(xué)校的署名權(quán)等權(quán)益，即在發(fā)表論文時(shí)蚌埠醫(yī)學(xué)院及相關(guān)部門科室應(yīng)署名為作者單位。聲明人完全理解本聲明的法律責(zé)任。3細(xì)菌基序及部分色素調(diào)節(jié)劑對(duì)黑素細(xì)胞的影響研究生：薛東章導(dǎo)師：張汝芝中文摘要目的：研究細(xì)菌基序

4、（CpGoligodeoxynucleotideCpGODN）和部分色素調(diào)節(jié)劑對(duì)鼠黑素瘤細(xì)胞B16、鼠永生化黑素細(xì)胞melana、正常人表皮黑素細(xì)胞（melanocyteMC）的形態(tài)、黑素生成及炎性因子分泌的影響。定位并分離培養(yǎng)人毛囊內(nèi)黑素細(xì)胞（humanfolliclemelanocytesHFM），為尋找體外刺激HFM增殖活化的CpGODN和藥物奠定基礎(chǔ)。方法：不同濃度的CpGODN、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocat

5、echingallateEGCG）、氫醌（hydroquinoneHQ）、煙酰胺（nicotinaeNAA）、α促黑素細(xì)胞激素（αmelanocytestimulatinghmoneαMSH）和維生素C磷酸酯鎂（magnesiumLbert2phosphateAPMg）分別干預(yù)體外培養(yǎng)的3種黑素細(xì)胞，即B16、melana及正常人MC，作用不同時(shí)間后，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化；甲基噻唑基四唑（methylthiazolyltetraz

6、olium，MTT）還原法檢測(cè)細(xì)胞活性；多巴氧化法測(cè)定酪氨酸酶活性；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reversetranionpolymerasechainreactionRTPCR）法檢測(cè)酪氨酸酶的mRNA表達(dá)；氫氧化鈉（sodiumhydroxideNaOH）裂解法測(cè)黑素生成；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzymelinkedimmunosbentassayELISA）檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中炎性因子即前列腺素E2和F2α（prostaglinE2F2αP

7、GE2PGF2α）水平。獲取胎兒頭皮（畸形引產(chǎn)，死亡2小時(shí)內(nèi)），制備冰凍切片，用黑素細(xì)胞的特異性標(biāo)記，NKIbeteb和HMB45抗體，免疫熒光染色，激光共聚焦顯微鏡觀察攝片。膠原酶Ⅱ消化頭皮，游離毛囊，0.25%胰酶EDTA消化毛囊，制備單細(xì)胞懸液，進(jìn)行培養(yǎng)。結(jié)果：（1）B16細(xì)胞：CpGODN干預(yù)24h后，5μgmlCpGODN促進(jìn)細(xì)胞增殖；但10μgml組對(duì)細(xì)胞增殖無顯著影響；15μgml組則抑制細(xì)胞增殖。干預(yù)48h后，各濃度組細(xì)