十一方藥酒涂擦對(duì)兔膝關(guān)節(jié)軟骨損傷微骨折技術(shù)后軟骨修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:隨著組織、細(xì)胞工程學(xué)近年來(lái)的發(fā)展，組織工程被利于治療關(guān)節(jié)軟骨缺損成為研究熱點(diǎn)已久。雖與已投入到臨床上使用的技術(shù)相比，組織工程用來(lái)修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損是一項(xiàng)新技術(shù)，但由于其出現(xiàn)的時(shí)間還尚短，技術(shù)也尚末十分成熟，還有相關(guān)的臨床研究仍在不斷探究。而微骨折技術(shù)以其操作創(chuàng)傷小，簡(jiǎn)單，并發(fā)癥少等優(yōu)點(diǎn)已成為日前臨床上修復(fù)膝關(guān)節(jié)軟骨缺損的常選擇的治療方法。本實(shí)驗(yàn)旨在探討用十一方藥酒外涂治療關(guān)節(jié)軟骨損傷微骨折技術(shù)后軟骨修復(fù)情況以及提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，從而更好

2、的服務(wù)、指導(dǎo)臨床工作。
　　 方法:1、模型制備及分組:用6～8月齡的成年新西蘭白兔40只，雌雄各半，在膝關(guān)節(jié)滑車關(guān)節(jié)面部制造成圓形全層軟骨缺損模型，最后形成直徑約4mm，深度約3mm的軟骨全層缺損。造模2周后再次手術(shù)切開(kāi)左膝關(guān)節(jié)進(jìn)行微骨折技術(shù)處理，手術(shù)第7天后從微骨折技術(shù)處理過(guò)的兔子中隨機(jī)選出24只兔子將其隨機(jī)平均分成三組即:實(shí)驗(yàn)組A（藥酒）、對(duì)照組B（純酒）及空白對(duì)照組C，給予實(shí)驗(yàn)組A和對(duì)照組B左膝部分別涂擦十一方藥酒和炮制

3、十一方藥酒用的純酒，2ml/次，3次/d。
　　 2、觀察指標(biāo):三個(gè)組于用藥干預(yù)滿8周、12周時(shí)用空氣栓塞法分別處死兔子4只，將兔左膝切開(kāi)取材后肉眼大體觀察標(biāo)本，拍照后立即將股骨遠(yuǎn)端取下放入4％中性甲醛液中固定，以后對(duì)標(biāo)本脫鈣后行石蠟包埋，常規(guī)切片，在光鏡下觀察包括HE染色和甲苯胺藍(lán)染色，根據(jù)wakitani評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)標(biāo)本的修復(fù)效果并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以及Ⅱ型膠原的免疫檢測(cè)。
　　 結(jié)果:1、大體觀察:所有實(shí)驗(yàn)用兔膝關(guān)節(jié)

4、活動(dòng)正常，傷口愈合良好;膝關(guān)節(jié)無(wú)感染、滲液及粘連;膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)可見(jiàn)清亮的關(guān)節(jié)液，軟骨缺損區(qū)周圍的軟骨無(wú)明顯磨損及骨贅出現(xiàn)。用藥干預(yù)滿8周，A組軟骨缺損區(qū)的修復(fù)組織與周圍正常軟骨存在界限但較模糊、色澤較相近。修復(fù)組織的表面稍欠光滑，但具有一定的彈性。B組與C組外觀相似，軟骨缺損區(qū)被纖維組織部分充填，仍有空洞存在。用藥干預(yù)滿12周，A組修復(fù)組織表面已光滑，完全把缺損區(qū)填平，較有彈性，與周圍軟骨色澤很相近，界限已模糊不清。B組與C組缺損區(qū)仍可見(jiàn)

5、明顯的缺損，修復(fù)組織表面不平整。
　　 2、組織學(xué)觀察:用藥干預(yù)滿8周時(shí)對(duì)各組標(biāo)本處理后在光鏡下觀察可見(jiàn):A組修復(fù)組織表面比較光滑，填充組織與周圍兩側(cè)正常軟骨大部分結(jié)合。修復(fù)組織內(nèi)的細(xì)胞呈現(xiàn)橢圓形或圓形，并出現(xiàn)軟骨陷窩和軟骨囊。但跟周圍正常軟骨間還存在一定的差異，主要表現(xiàn)為新生組織內(nèi)細(xì)胞數(shù)量較多，細(xì)胞排列紊亂。修復(fù)組織的甲苯胺藍(lán)染色異染性還較明顯。B組標(biāo)本光鏡下所見(jiàn)與C組相似觀察缺損區(qū)均可見(jiàn)大量空泡和纖維組織，修復(fù)組織與周圍組織

6、的愈合較差，軟骨細(xì)胞排列也較紊亂。用藥干預(yù)滿12周，A組標(biāo)本修復(fù)組織為透明樣軟骨，其表面已光滑，與兩側(cè)正常軟骨組織愈合良好，細(xì)胞數(shù)目較前減少，呈現(xiàn)出的排列趨勢(shì)為柱狀。修復(fù)組織的甲苯胺藍(lán)染色跟周圍組織相近無(wú)明顯差異。B組和C組表現(xiàn)相似，修復(fù)表面仍不光滑，軟骨細(xì)胞的排列還不規(guī)則，仍有較多的纖維組織散在其間。跟周圍的軟骨組織愈合仍較差。修復(fù)組織的甲苯胺藍(lán)染色仍呈明顯異染性。
　　 三組實(shí)驗(yàn)的組織學(xué)方面的評(píng)分:用藥干預(yù)滿8周、12周，A

7、組的軟骨缺損修復(fù)情況要優(yōu)于B及C組(P＜0.05）;B、C組的軟骨缺損修復(fù)情況無(wú)明顯差異(P＞0.05)。各組12周的軟骨缺損修復(fù)情況均優(yōu)于8周。
　　 3、Ⅱ型膠原的免疫組化:A組用藥干預(yù)滿8周，可見(jiàn)在修復(fù)組織內(nèi)部分軟骨細(xì)胞的胞漿呈現(xiàn)黃色，呈陽(yáng)性的Ⅱ型膠原染色。B組和C組相似，細(xì)胞外間質(zhì)和細(xì)胞質(zhì)中Ⅱ型膠原染色呈現(xiàn)弱陽(yáng)性（淺黃）;用藥干預(yù)滿12周，A組中修復(fù)組織的細(xì)胞呈橢圓形或圓形，呈現(xiàn)的排列趨勢(shì)為柱狀，Ⅱ型膠原表達(dá)呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性。