2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、肝臟組織工程研究始于二十世紀(jì)九十年代,它旨在構(gòu)建可植入性肝臟,從而緩解肝臟器官來源的緊缺,是解決肝疾病的最佳途徑和方式。同其他組織工程一樣,肝臟組織工程研究主要集中在以下幾個方面:種子細(xì)胞,如骨髓源干細(xì)胞,肝卵圓細(xì)胞,原代肝細(xì)胞,胚胎肝細(xì)胞,肝細(xì)胞株等;支架材料,包括天然基質(zhì)材料和合成高分子聚合物;生長因子和細(xì)胞因子,它們可促進(jìn)細(xì)胞增殖,組織或血管的修復(fù)和再生;以及血管化問題等。其中血管重建是肝臟組織工程的重點和難點之一,大量研究表明,

2、原代肝細(xì)胞很難在體外大量增殖與傳代,同時肝細(xì)胞聚集體內(nèi)部細(xì)胞容易死亡,此類狀況均與缺乏微血管及膽管系統(tǒng)有關(guān)。在肝再生過程中,由肝實質(zhì)細(xì)胞分泌的血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial
   growth factor VEGF)是參與肝臟組織結(jié)構(gòu)重建和血管形成的重要生長因子,實驗中通過檢測VEGF在大鼠肝再生過程中的經(jīng)時變化,探討VEGF在肝再生中的重要作用。
   肝臟組織工程中生長因子的應(yīng)用主要是在

3、培養(yǎng)體系中直接加入,另外也有文獻(xiàn)報道將生長因子與材料結(jié)合以固定化生長因子的形式使用。但由于生長因子半衰期短,這為研究工作增加了成本。隨著基因工程學(xué)和材料學(xué)的不斷融合發(fā)展,設(shè)計開發(fā)VEGF質(zhì)粒基因裝載支架,實現(xiàn)在支架上培養(yǎng)細(xì)胞的同時完成基因轉(zhuǎn)染,使細(xì)胞持續(xù)自主地表達(dá)目的基因的研究工作具有很大的發(fā)展?jié)摿?。實驗中利用了陽離子多聚物聚乙烯亞胺(PEI),它可濃縮DNA形成納米級顆粒,作為基因釋放載體轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。通過考察PEI的細(xì)胞毒性,為進(jìn)一

4、步進(jìn)行基因裝載支架的構(gòu)建奠定基礎(chǔ)。
   實驗方法:wistar雄性大鼠隨機分為正常對照組、假手術(shù)組和實驗組。實驗組大鼠被切除70%的肝臟,分別于術(shù)后不同時段取出肝臟。用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測肝組織中VEGF的表達(dá)變化,增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的變化,以及肝竇形成情況。同時選用分子量為25000,分枝狀的聚乙烯亞胺結(jié)合質(zhì)?;騪-MSCV-VEGF165,通過MTT法和凝膠電泳阻滯實驗考察PEI的細(xì)胞毒性以及PEI和DNA的最佳

5、結(jié)合比例。
   實驗結(jié)果:正常肝組織中VEGF幾乎無表達(dá);肝切除術(shù)(PH)后48小時VEGF表達(dá)量顯著增加,主要分布于門管區(qū)周圍;術(shù)后72小時VEGF的表達(dá)量達(dá)到高峰,幾乎遍及整個肝小葉;之后VEGF的表達(dá)量逐漸減少至正常水平。增殖細(xì)胞核抗原PCNA是反映細(xì)胞增殖狀態(tài)的一個重要指標(biāo),它定位于細(xì)胞核。免疫組化結(jié)果顯示,大鼠70%肝切除術(shù)后48小時肝細(xì)胞增殖數(shù)量達(dá)到高峰,肝竇內(nèi)皮細(xì)胞稍慢于肝細(xì)胞的增殖,72小時增殖達(dá)到頂峰。肝切除

6、術(shù)后的一周內(nèi),竇狀隙的大小逐步變化,肝竇經(jīng)歷了降解和重建的過程。同時,分子量為25000的聚乙烯亞胺PEI是一種毒性較低的基因轉(zhuǎn)染載體,體外二維肝原代細(xì)胞培養(yǎng)體系中PEI最大使用濃度約為40μg/ml,PEI和DNA最佳結(jié)合比例約為3/1。
   通過實驗了解了肝再生過程中大部分VEGF由肝細(xì)胞分泌,肝細(xì)胞增殖可增強VEGF的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的分裂增殖,成為誘導(dǎo)肝臟微結(jié)構(gòu)構(gòu)建的主要因素之一,顯示出VEGF在肝再生過程中具有

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