內(nèi)臟高敏感大鼠結(jié)腸特異背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的興奮性及TRPV1、P2X3受體表達(dá)研究.pdf

1、背景與目的:腸易激綜合征(abdominal withdrawal reflex,IBS)是一組以腹痛或腹部不適同時伴有排便習(xí)慣及大便性狀改變?yōu)榘Y狀的腸道功能性疾病。臨床上較為常見,人群流行病學(xué)調(diào)查顯示IBS的發(fā)病率約為5％~10%[1],歐美等發(fā)達(dá)國家發(fā)病率較高,國內(nèi)以北京、廣州、上海、浙江等地高發(fā)。該病嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,但其發(fā)病機制尚未完全清楚。目前認(rèn)為IBS的發(fā)病可能與內(nèi)臟感覺異常、腸道動力異常、感染、神經(jīng)-內(nèi)分泌、遺傳等多

2、種因素有關(guān),其中內(nèi)臟感覺異常被認(rèn)為是IBS主要的病理生理學(xué)基礎(chǔ)。在內(nèi)臟感知過程中,長期以來人們推測來自胃腸道的疼痛感覺是由脊髓傳入纖維所介導(dǎo)的[2],疼痛信號起源于初級傷害性受體外周末梢,一種位于脊髓背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion neurons,DRG)上的特殊神經(jīng)元,傷害性感受器能通過特殊受體如瞬時感受器電位香草素受體1(transient receptor potential vanilloid type-1

3、,TRPV1)和/或P2X嘌呤能受體(P2X purinoreceptors,P2XRs)將傷害性刺激轉(zhuǎn)變?yōu)橐环N電信號,并將這種信號由外周向中樞神經(jīng)傳遞,引起相應(yīng)的反射,調(diào)節(jié)內(nèi)臟活動。但目前,TRPV1和P2XRs對內(nèi)臟感覺調(diào)節(jié)的確切作用機制仍不清楚。因此在本研究中,我們采用大鼠乙酸造模制備內(nèi)臟高敏感模型,用1,1'-二(十八烷基)-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰基花青高氯酸鹽(DiI)逆行示蹤標(biāo)記結(jié)腸特異背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元,探討結(jié)腸特

4、異背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的興奮性及TRPV1、P2X3受體表達(dá)情況,為研究IBS相關(guān)性腹痛提供新的治療靶點。
　　方法:出生10天的大鼠,結(jié)腸內(nèi)給予0.5%乙酸(acetic acid,AA)溶液制備內(nèi)臟高敏感大鼠模型(AA組),對照組(NS組)給予同等量0.9%生理鹽水(normalsaline,NS)。對成年后的大鼠進(jìn)行結(jié)直腸擴張(CRD),主要用腹部回撤反射(AWR)值來評估內(nèi)臟敏感性。在結(jié)腸壁上注射DiI逆行標(biāo)記的DRG神經(jīng)元為

5、結(jié)腸特異DRG神經(jīng)元,酶解分離神經(jīng)節(jié)成單細(xì)胞后,熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)并計數(shù)。采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄神經(jīng)元的閾電位和動作電位頻率來反映結(jié)腸特異DRG神經(jīng)元的興奮性。用免疫熒光技術(shù)觀察結(jié)腸特異背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元上TRPV1、P2X3受體表達(dá)情況,并分別計算AA組AWR評分值與結(jié)腸特異DRG神經(jīng)元上TRPV1受體陽性率、動作電位頻率、閾電流值的相關(guān)性,與結(jié)腸特異DRG神經(jīng)元上P2X3受體陽性率、動作電位頻率、閾電流值的相關(guān)性。
　　

6、結(jié)果:
　　1.AA組大鼠在結(jié)腸乙酸灌注后出現(xiàn)排便異常,在每日進(jìn)行刺激時,大鼠表現(xiàn)比較煩躁、畏懼和嘶叫,隨著天數(shù)增加,出現(xiàn)易激惹和好斗傾向;
　　2.與NS組相比,AA組大鼠分別在同一結(jié)直腸擴張壓力(5.332、7.998、10.664kPa)下AWR值明顯增高(P<0.05);
　　3.AA組結(jié)腸特異DRG神經(jīng)元細(xì)胞直徑多分布于為35~45μm,NS組為25~35μm;
　　4.AA組神經(jīng)元閾電流低于NS組(P

7、<0.05),2倍閾電流刺激下,引發(fā)出的AA組動作電位頻率高于NS組(P<0.05)。
　　5.AA組結(jié)腸特異DRG神經(jīng)元上TRPV1和P2X3受體免疫陽性率較正常組明顯增加(P<0.01).
　　6.AA組AWR評分值在不同壓力結(jié)直腸擴張下均與結(jié)腸特異DRG神經(jīng)元上TRPV1受體陽性率(P<0.01)、動作電位頻率(P<0.01)呈正相關(guān)、與閾電流值(P<0.05)呈負(fù)相關(guān);與結(jié)腸特異 DRG神經(jīng)元上 P2X3受體陽性率(