重組人內(nèi)皮抑素對尿毒癥腹膜透析大鼠腹膜bFGF及CD34表達的影響.pdf

1、背景和目的
　　 腹膜透析(peritoneal dialysis，PD)是終末期腎臟病(end-stage renal disease，ESRD)患者替代治療的方式之一。由于PD具有操作簡單方便、無需建立血管通路、對血流動力學的影響小、丙型肝炎的感染率低、可以更好的保護殘余腎功能等優(yōu)點，已成為許多ESRD患者首選的替代治療方式。然而，長期PD患者的腹膜組織將發(fā)生血管新生和通透性增加，導致超濾量的減少，乃至超濾衰竭(ultraf

2、iltration failure，UFF)的發(fā)生。UFF是長期腹膜透析的主要并發(fā)癥，已成為患者退出腹透乃至死亡的主要原因之一。隨著對腹透超濾衰竭發(fā)生機制認識的不斷深入，目前認為，在超濾衰竭的諸多發(fā)生機制中，腹膜新生血管的形成在其中處于主導地位，是促使超濾衰竭發(fā)生的主要原因。對腹透失超濾患者行腹膜組織病理學檢查，發(fā)現(xiàn)腹膜組織確有新生血管生成增多的現(xiàn)象。
　　 就血管發(fā)生機制而言，目前流行的是Hanahan提出的血管生成開關(guān)平衡假

3、說。該學說認為：血管生成時，血管內(nèi)皮細胞的增殖和遷徙受誘導劑和抑制劑的雙重調(diào)節(jié)。正常情況下，促進血管生成的誘導劑與抑制劑處于平衡狀態(tài)，一旦平衡被打破，誘導劑多于抑制劑，就會激活內(nèi)皮細胞促進新生血管形成，反之，抑制劑多于誘導劑，那么內(nèi)皮細胞的生長就會受到抑制使血管退化。在誘導劑中，堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)是成纖維生長因子家族中的一員，因其分布廣泛，促血管新生作用強，受

4、到廣泛關(guān)注，bFGF是已發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)最為有效的血管形成因子之一。有報道指出bFGF除自身作用外，還可與血管內(nèi)皮生長因子VEGF協(xié)同作用參與血管形成。而血管內(nèi)皮抑素(Endostatin，ES)是膠原蛋白ⅩⅧ的片段，是目前發(fā)現(xiàn)的最特異的抑制血管增殖和遷移作用最強烈的血管生成抑制因子。研究發(fā)現(xiàn)，它可以特異性的抑制新生血管內(nèi)皮細胞的增殖，從而阻斷腫瘤細胞的血流供應(yīng)和營養(yǎng)，實現(xiàn)遏制腫瘤生長，達到治療腫瘤的目的。但其能否有效抑制腹膜新生血管的形成尚

5、不清楚。CD34和微血管密度是反映新生血管形成變化的理想指標。
　　 因此，本研究在以往體、內(nèi)外實驗的理論與實驗基礎(chǔ)上，進行體內(nèi)實驗的干預(yù)研究，通過建立5/6腎切除尿毒癥大鼠腹膜透析動物模型，模擬人體內(nèi)腹透過程，選取bFGF及微血管密度作為檢測指標，通過觀察重組人內(nèi)皮抑素作用與尿毒癥腹膜透析大鼠后，bFGF及微血管密度在尿毒癥腹膜透析大鼠腹膜組織表達的變化，尋找抑制腹膜血管新生的有效方法，并初步探討重組人內(nèi)皮抑素抑制腹膜血管新生

6、的可能作用機制，為臨床維持長期有效的腹膜透析、防治腹膜超濾衰竭的發(fā)生提供實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 清潔級雄性SD大鼠43只，體質(zhì)量為180-200g。構(gòu)建5/6腎切除尿毒癥大鼠模型，進一步構(gòu)建尿毒癥腹膜透析大鼠模型。實驗分為A：對照組(正常組：n=8只)，B：尿毒癥組(5/6腎切除組：n=8只)、C：尿毒癥腹膜透析組(4.25％PD組：n=8只)、D1：重組人內(nèi)皮抑素治療1組(10mg/kg組：n=8只)，D2：重

7、組人內(nèi)皮抑素治療2組(40mg/kg組：n=8只)。對C、D1、D2組大鼠進行規(guī)律腹透，每日每只4.25％的腹透液3ml/100克大鼠體重從大鼠頸部腹透管注入，腹腔保留2h后放出液體，規(guī)律透析28天。D1、D2組(重組人內(nèi)皮抑素治療1、2組)在規(guī)律腹透期間，隔天皮下注射重組人內(nèi)皮抑素，連續(xù)給藥14次，直至腹透第28天結(jié)束，留取各組大鼠新鮮腹膜組織，采用免疫組織化學及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法檢測腹膜組織bFGF基因及蛋白水

8、平的表達，用CD34染色觀察各組大鼠腹膜血管數(shù)并計算腹膜組織毛細血管密度(Microvessel Density，MVD)，所得結(jié)果進行統(tǒng)計學分析，選取α=0.05作為差異具有統(tǒng)計學意義的檢驗水準。
　　 結(jié)果：
　　 1.與正常組相比較，尿毒癥組、尿毒癥腹膜透析組大鼠腹膜組織bFGF基因及蛋白表達均升高，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。與尿毒癥腹膜透析組相比較，重組人內(nèi)皮抑素治療1組、重組人內(nèi)皮抑素治療2組大鼠腹膜

9、組織bFGF基因及蛋白表達均降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與重組人內(nèi)皮抑素治療1組相比較，重組人內(nèi)皮抑素治療2組大鼠腹膜組織bFGF基因及蛋白表達降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 2.與正常組相比較，尿毒癥組、尿毒癥腹膜透析組大鼠腹膜組織MVD值均增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與尿毒癥腹膜透析組相比較，重組人內(nèi)皮抑素治療1組、重組人內(nèi)皮抑素治療2組大鼠腹膜組織MVD值均降低，差異具有統(tǒng)計學

10、意義(P<0.05)。與重組人內(nèi)皮抑素治療1組相比較，重組人內(nèi)皮抑素治療2組大鼠腹膜組織MVD值降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 3.bFGF與MVD蛋白表達呈現(xiàn)正相關(guān)，bFGF和尿毒癥長期腹透時腹膜血管新生相關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 1.體內(nèi)尿毒癥環(huán)境和高糖腹透液可以上調(diào)腹膜組織bFGF基因及蛋白表達。
　　 2.腹膜組織新生毛細血管形成可能與bFGF基因及蛋白表達上調(diào)有關(guān)。