復(fù)方茵陳制劑對動物保肝作用機理的研究.pdf

1、目的：研究復(fù)方茵陳制劑的藥動學(xué)、藥效學(xué)及其保肝的作用機理，利用反相高效液相色譜法測定了復(fù)方茵陳制劑中黃芩苷的含量，建立了質(zhì)控指標(biāo)；研究復(fù)方茵陳制劑在小鼠體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)，計算出動力學(xué)參數(shù)；研究復(fù)方茵陳制劑對體內(nèi)急性CCL4肝損傷和體外H2O2肝細胞損傷的保護作用及其作用機理，旨在為復(fù)方茵陳制劑的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。 方法：(1)采用反相高效液相色譜法測定復(fù)方茵陳制劑中黃芩苷的含量。色譜條件如下：HanbonC18柱，甲醇-

2、水-磷酸(47∶53∶0.2)為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長為280nm。含量測定采用外標(biāo)法。 (2)按5.5g/kg，11g/kg，16.5g/kg的劑量分別對小鼠連續(xù)給藥4d，第3d頸部皮下注射0.5％的四氯化碳(CCL4)-花生油溶液(0.1mL/10g)，分離血漿和肝臟，研究復(fù)方茵陳制劑對急性肝損傷的組織學(xué)變化及其對堿性磷酸酶(AlkalinePhosphataseAKP)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(Alanineam

3、initransperaseALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AspartateaminotransferaseAST)、超氧化物歧化酶(SuperoxidedismutaseSOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutanthioneperoxideseGSH-Px)的活力、丙二醛(maleicdialdehydeMDA)含量的影響。 (3)按16.5g/kg的劑量給小鼠口服復(fù)方茵陳制劑，用高效液相色譜法檢測用藥后不同時間0.25，0.5，

4、1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，8.0，12.0，14.0，16.0，20.0，24.0h血漿中藥物黃芩苷的質(zhì)量濃度，研究在小白鼠體內(nèi)的藥物動力學(xué)。 (4)血清藥理學(xué)試驗，采用體外培養(yǎng)法獲取小鼠肝細胞，以細胞活率為指標(biāo)，比較了肝組織塊外植培養(yǎng)、肝組織塊直接過篩法和膠原酶分離法的分離效果。用H2O2對新鮮分離的小鼠原代肝細胞建立體外損傷模型。檢測不同時期給藥后，肝細胞培養(yǎng)上清液AST、ALT、SOD、MDA的釋放量

5、，比較含藥血清不同時間對肝細胞保護的影響。 結(jié)果：(1)黃芩苷在12～240ug/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，以濃度對峰面積的響應(yīng)值回歸，得線性方程為Y=2.39e+004x-3.62e+004，r=0.9985。日內(nèi)精密度RSD為5.76％，重復(fù)性RSD為0.51％，經(jīng)穩(wěn)定性考察，樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好，其RSD為0.61％，方法的回收率為96.69±0.2％。 (2)注射CCL416h后，模型組小鼠的血漿AST、ALT

6、比對照組分別提高1¨.6％和847.14％，差異極顯著(P＜0.01)；高中低藥組比模型組的血漿AST分別降低38.10％，32.23％，28.21％，差異極顯著(P＜0.01)；比模型組的血漿ALT分別降低72.25％，42.99％，32.24％，差異極顯著(P＜0.01)。AKP除陽性藥組與對照組比較有顯著性差異外，其余組間均不存在顯著性。 模型組的SOD和GSH-Px比對照組含量分別降低48.49％和28.57％,MDA比

7、對照組含量增加102.77％。與模型組比較，高劑量組和中劑量組SOD分別提高361.76％和197.06％。GSH-Px分別提高94.29％和85.71％，差異極顯著(P＜0.01)，但低劑量組則無顯著差異。高劑量組的MDA與模型組比較，含量降低54.33％，有顯著差異(P＜0.05)，但中、低劑量組則無顯著差異。 模型組肝臟系數(shù)比對照組降低15.68％，有顯著差異(P＜0.05)，但與模型組相比，給藥組均無顯著差異。

8、組織病理學(xué)顯示，給藥組小鼠肝細胞變性、壞死程度明顯輕于造模組，其中以高劑量組效果最好。 (3)結(jié)果表明黃芩苷在小鼠體內(nèi)的藥時數(shù)據(jù)符合開放性二室模型，動力學(xué)方程為C=16.761e-0.45137t+3.0982e-0.03458t+20.996e-2.1282t。主要藥代動力學(xué)參數(shù)：T1/2α1.5357h，T1/2β5.25±2.96h，T1/2Ka0.3257h，AUC0→∞128.99mg.L-1.h，CL/F0.1938

9、1L/h，Vd/F6.3633L/kg，Tpeak1.0508h，Cmax11.188μg/mL。 (4)結(jié)果顯示膠原酶分離法獲得較好的分離效果。AST和ALT模型組均極顯著地低于對照組(P＜0.01)；AST藥物組(16.5g/kg)極顯著低于模型組(P＜0.01)；ALT藥物組(16.5g/kg)與模型組比較，有顯著性差異；SOD模型組與對照組比較無顯著差異，藥物組(16.5g/kg)極顯著地高于模型組(P＜0.01)；MD

10、A模型組極顯著地高于對照組(P＜0.01)，藥物組(16.5g/kg)極顯著地低于模型組(P＜0.01)。 藥物血清在添加損傷的肝細胞后3～6d中，藥物組(16.5g/kg)AST在第3～5d極顯著低于模型組(P＜0.01)，第6d為顯著差異(P＜0.05)；ALT只在第3和第4d有極顯著差異(P＜0.01)。 結(jié)論：復(fù)方茵陳制劑中的有效成分-黃芩苷在小鼠體內(nèi)的藥時數(shù)據(jù)符合開放性二室模型，具有減輕致病因素對肝細胞損害程度