姜黃素在大鼠體內(nèi)生物利用度研究.pdf

1、目的:
　　建立高效液相色譜法(HPLC)法測(cè)定大鼠血漿姜黃素濃度的方法，研究姜黃素不同給藥途徑在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)和絕對(duì)生物利用度。
　　方法:
　　1建立大鼠血漿姜黃素的高效液相色譜檢測(cè)法:高效液相色譜儀為Agilent1100系列，包括G1311A四元泵、G1322A在線脫氣機(jī)、G1316A柱溫箱、G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1315B二極管陣列檢測(cè)器、Agilent化學(xué)工作站(RevB.08.04.[1757]

2、)。色譜柱選用ZORBAX SB-C18（4.6 m×150 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-水-0.1％TFA(50∶30∶20)，流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng):302nm(0-5.5 min)、426nm(5.5-7.5 min)。血漿樣品300μ L于10mL具塞試管中，加入100 mg·L-1的AF-2364內(nèi)標(biāo)工作液50μL，混勻后加入0.01 mol·L-1的氫氧化鈉溶液200μL，再加入乙酸乙酯3.0mL，漩渦混

3、勻2 min。轉(zhuǎn)移上層有機(jī)相于另一刻度離心管中，氮吹儀中吹干。用200μL流動(dòng)相復(fù)溶，取復(fù)溶液于自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品瓶中，設(shè)定10μL進(jìn)樣檢測(cè)。
　　2生物利用度試驗(yàn):按不同給藥方式把21只大鼠分為3組，分別舌下靜脈給藥，腹腔注射給藥和灌胃給藥。給藥前取空白血，iv（舌下靜脈）組給藥前用10％水合氯醛麻醉，給姜黃素劑量為10 mg·kg-1(DMSO溶解)，給藥后分別于5，8，10，15，20，25，35，45，60，120，180

4、min尾靜脈取血;ip（腹腔注射）組給姜黃素劑量為20mg·kg-1（1∶1無(wú)水乙醇∶DMSO溶解），給藥后分別于5，10，15，25，35，45，60，120，180，240，300，360 min尾靜脈取血;ig（灌胃）組給姜黃素劑量為200mg·kg-1(5％DMSO-玉米油溶解)，給藥后分別于5，10，15，25，35，45，60，120，180，240，300，360 min尾靜脈取血。每次均采血0.6mL，注入肝素化的試管，

5、離心（3000 r·min-1）取血漿，-40℃冰凍保存?zhèn)錅y(cè)。用高效液相色譜法分析各點(diǎn)姜黃素的濃度，用DAS軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)以AUC(0-∞)計(jì)算絕對(duì)生物利用度。
　　結(jié)果:
　　1姜黃素純標(biāo)準(zhǔn)品、空白血漿、姜黃素血漿標(biāo)準(zhǔn)以及大鼠血漿樣品，經(jīng)HPLC分析測(cè)定得到的色譜圖，可見(jiàn)姜黃素與內(nèi)標(biāo)能完全分離，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾姜黃素和內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)，姜黃素的保留時(shí)間為6.7 min，內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間為4.4min。姜黃素濃度在0.05

6、～6.00 mg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9998);定量下限為0.05 mg·L-1;低、中、高三種濃度(0.10，1.00，4.00 mg·L-1)的日內(nèi)RSD（精密度）分別為4.49％、3.90％和1.72％，日間RSD（精密度）分別為4.61％、4.27％和2.00％;低、中、高三種濃度(0.10，1.00，4.00 mg·L-1)的相對(duì)回收率分別為(99.59±5.40)％、(104.21±4.72)％和(99.83

7、±1.97)％;絕對(duì)回收率分別為77.18±3.48、77.84±1.22和78.25±0.81。姜黃素血漿樣品在室溫放置、凍融條件及冰凍保存的條件下對(duì)血漿樣品的檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有明顯的影響。本方法具有較高的專(zhuān)屬性。
　　2大鼠舌下靜脈、腹腔注射和灌胃給于姜黃素后，姜黃素在大鼠體內(nèi)均符合二室模型;AUC（0-∞）分別為(104.62±11.89) mg·min·L-1、(73.39±8.72)、mg· min·L-1、(86.36±12

8、.90) mg·min·L-1。按劑量折算，姜黃素經(jīng)腹腔注射給藥的絕對(duì)生物利用度為35.07％，經(jīng)灌胃給藥的絕對(duì)生物利用度為4.13％。
　　結(jié)論:
　　1本試驗(yàn)建立的高效液相色譜紫外法檢測(cè)大鼠血漿姜黃素濃度的方法，專(zhuān)屬性高，方法回收率均在85％～115％范圍內(nèi)，絕對(duì)回收率大于70％;日內(nèi)和日間變異均小于10％，符合藥代動(dòng)力學(xué)研究的要求。
　　2不同給藥途徑姜黃素的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程相似，腹腔注射給藥的絕對(duì)生物利用度高