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1、目的:通過電轉(zhuǎn)化法介導(dǎo)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)和EGFP基因轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),觀察Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)情況。
方法:取3只1周齡清潔級(jí)健康新西蘭大白兔,麻醉后處死,無菌條件下取出脛骨及股骨,暴露髓腔沖出骨髓,應(yīng)用全骨髓細(xì)胞貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)出兔的BMSCs;流式細(xì)胞儀法檢測(cè)細(xì)胞表型;將培養(yǎng)獲得的BMSCs分3組:TGF-β1+EGFP共轉(zhuǎn)染組,EGFP單獨(dú)轉(zhuǎn)染組,空白對(duì)照組。利用電轉(zhuǎn)化技術(shù)將TGF-β
2、1和EGFP對(duì)BMSCs進(jìn)行轉(zhuǎn)染,熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效果,繼續(xù)培養(yǎng)至14d[1],應(yīng)用免疫組化法和western blot法分別檢測(cè)Ⅱ型膠原表達(dá)情況。
結(jié)果:成功分離并培養(yǎng)出BMSCs,經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定其細(xì)胞表型CD90和CD44表達(dá)為陽(yáng)性,CD31和CD45表達(dá)為陰性;成功轉(zhuǎn)染TGF-β1至BMSCs后;通過免疫組化檢測(cè)TGF-β1組細(xì)胞內(nèi)(0.4870±0.0181)Ⅱ型膠原有較強(qiáng)的表達(dá),與EGFP組(0.0858±0.0
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