多肽藥物促進(jìn)傷口愈合動物實(shí)驗(yàn).pdf

1、自然界中存在著大量具有生物學(xué)活性的多肽物質(zhì)，多肽作為生物體內(nèi)的重要組成部分之一，它們在機(jī)體的生理與病理生理過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。小分子多肽作為藥物具有其獨(dú)特的優(yōu)勢：分子量小，無免疫原性；結(jié)構(gòu)簡單，副作用??；分子小，易于合成，生產(chǎn)成本相對較低；產(chǎn)品純度高，無致熱原等問題。因此，目前在世界范圍內(nèi)應(yīng)用活性多肽作為藥物、疫苗、酶抑制劑、導(dǎo)向藥物及藥物先導(dǎo)藥己成為研究的熱點(diǎn)課題。 在表皮組織修復(fù)愈合過程中，表皮細(xì)胞的遷移、增殖和分泌

2、受到多種細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。細(xì)胞因子在創(chuàng)傷愈合中產(chǎn)生三種生物效應(yīng)，即趨化作用、合成分泌作用和增殖分化作用。此外，還通過直接與間接方式控制細(xì)胞外基質(zhì)（膠原、透明質(zhì)酸等）的合成與分解代謝。細(xì)胞因子的發(fā)現(xiàn)及其研究的日益深入，為治愈創(chuàng)傷，加速愈合提供了新的途徑。 近年來，隨著對表皮生長因子（EGF）研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)表皮生長因子除了具有對多種組織來源的表皮細(xì)胞有很強(qiáng)的促分裂功能之外，還具有使表皮干細(xì)胞再分布的作用。我們知道表皮這些潛在的干

3、細(xì)胞是表皮再上皮化的細(xì)胞來源。在正?；铙w, 表皮干細(xì)胞位于表皮基底層，約占基底層細(xì)胞的1％～10％。而經(jīng)過EGF治療后，在表皮中接近終末分化程度的棘層或顆粒層出現(xiàn)表皮干細(xì)胞異位獨(dú)特現(xiàn)象。 安基奧101是在皮膚創(chuàng)傷愈合過程中發(fā)現(xiàn)具有活性的小分子多肽，屬于胸腺素β家族，序列為NH2-MSDKPDLSEVETFDK SKLKKTNTEEKNTLPSKETIQQEKEYNQRS-COOH，含有45個氨基酸，分子量約為5305，采用固相合

4、成法合成，并用液相色譜（HPLC）和質(zhì)譜（MS）分析法，符合安基奧101序列及分子量。 本實(shí)驗(yàn)采用制作動物模型，用直徑為2毫米的至傷器，在背部制成直徑為2毫米的標(biāo)準(zhǔn)傷口，實(shí)驗(yàn)時間為2周，并在第4、7、10天測量傷口直徑大小，觀察傷口愈合時間，取傷口及附近正常皮膚做HE染色病理檢查及β1整合素、K19免疫組化。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對第4、7、10天測量傷口大小及傷口愈合時間進(jìn)行比較，安基奧101多次給藥組、陽性對照組傷口愈合明顯快

5、于安基奧101單次給藥組、陰性對照組，分別做統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，有顯著性差異，而安基奧101多次給藥組和陽性對照組兩組比較，無明顯差異，安基奧101單次給藥組和陰性對照組比較，無明顯差異，說明安基奧101多次給藥對傷口愈合有明顯促進(jìn)作用，作用效果與rhEHF相似，而安基奧101單次給藥對傷口愈合無明顯作用，與陰性對照組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。對傷口及附近正常皮膚做HE染色病理比較，安基奧101多次給藥組、陽性對照組上皮化明顯高于陰性對照組、安基奧101

6、單次給藥組，分別做統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，有顯著性差異，而安基奧101多次給藥組和陽性對照組比較，無明顯差異，安基奧101單次給藥組和陰性對照組比較，無明顯差異，說明安基奧101多次給藥有明顯促上皮化作用，而安基奧101單次給藥則無促上皮化作用。對傷口及附近正常皮膚做β1整合素、K19免疫組化，陰性對照組、安基奧101單次給藥組在表皮未見β1、K19陽性細(xì)胞表達(dá)，陽性對照組和安基奧101多次給藥組在表皮基底層可見β1、K19陽性細(xì)胞表達(dá)，在表皮棘層

7、和顆粒層也可見散在β1、K19陽性細(xì)胞表達(dá)，說明安基奧101多次給藥也具有使表皮干細(xì)胞再分布的作用，而有部分安基奧101多次給藥組在表皮棘層和顆粒層未見β1、K19陽性細(xì)胞表達(dá)，原因尚不明確；安基奧101單次給藥不具有使表皮干細(xì)胞再分布的作用。 安基奧101有使表皮干細(xì)胞再分布作用，在表皮中接近終末分化程度的棘層或顆粒層出現(xiàn)表皮干細(xì)胞異位獨(dú)特現(xiàn)象，考慮作用機(jī)制與rhEGF類似，可能有以下原因：（1）表皮干細(xì)胞產(chǎn)生了“跳躍”，即伴

8、隨著機(jī)體創(chuàng)傷修復(fù)信號的啟動，表皮干細(xì)胞快速地向表皮上層遷移，能動地參與創(chuàng)面的修復(fù)；（2）由于機(jī)體創(chuàng)傷修復(fù)的緊迫性，雖然表皮干細(xì)胞脫離表皮基底層進(jìn)入分化狀態(tài)而形成了短暫擴(kuò)充細(xì)胞，但這種暫時增殖細(xì)胞的狀態(tài)尚屬幼年期，仍表達(dá)表皮干細(xì)胞的某些特征；（3）創(chuàng)緣的皮膚附屬器（如毛囊）內(nèi)的干細(xì)胞接到了創(chuàng)傷修復(fù)的指令，啟動毛囊隆突內(nèi)的毛囊干細(xì)胞-表皮的通路，參與修復(fù)。安基奧101有明顯促進(jìn)傷口愈合、促上皮化增生作用，考慮其作用機(jī)制除了具有使表皮干細(xì)胞再