TFDP3對前列腺癌LNCaP細胞自噬及凋亡調控的初步研究.pdf

1、前列腺癌（prostate cancer，PCa)是男性腫瘤中僅次于肺癌的惡性腫瘤之一。但是由于前列腺癌大多發(fā)生隱匿，一旦確診，很大一部分患者基本已經(jīng)到了中晚期，預后較差。目前治療前列腺癌的一般方式是去雄激素治療，旨在激素治療后誘導腫瘤細胞的凋亡。但是這種治療措施在初期雖然有效，一段時間后幾乎所有患者都會由雄激素依賴轉變?yōu)榉切奂に匾蕾囆?，最終導致腫瘤的進展或轉移。雄激素依賴到非依賴的轉變機制在各領域研究備受關注，目前已知的機制包括雄激素

2、受體（AR）突變、克隆選擇、共激活因子（Coactivator）的表達等，目的都是各種方式避免前列腺癌細胞的凋亡。研究表明，自噬是降解細胞器的主要途徑，一定條件下，在細胞凋亡中自噬可能會起到保護作用，抑制細胞自噬會誘導細胞的凋亡。另一方面，細胞的凋亡途徑受到抑制后也可能導致細胞的自噬性死亡。目前，在前列腺中雄激素非依賴的形成是否和自噬有一定的調控關系，或者在前列腺中自噬和凋亡如何被調控，并沒有明確的結論。
　　TFDP3是新發(fā)現(xiàn)的

3、E2F1的直接調控因子。有研究表明TFDP3不僅可以抑制E2F1誘導的細胞增殖，而且還可以抑制E2F1誘導的細胞凋亡；但是在前列腺癌中是否參與了凋亡和自噬作用有待研究及進一步驗證。
　　本研究通過免疫組化和原位雜交探索TFDP3在前列腺癌組織中的表達；通過半定量 RT-PCR檢測TFDP3在前列腺癌細胞中的表達。然后，分別通過RT-PCR和Western blot初步探索TFDP3在E2F1作用后自噬相關蛋白LC3B基因水平和蛋白

4、水平的變化，并且利用流式細胞儀檢測TFDP3與E2F1的相互作用對前列腺癌細胞凋亡的影響。
　　主要研究內容包括：
　　1.通過NCBI基因組數(shù)據(jù)庫檢索到TFDP3基因的DNA序列，利用軟件Primer5.0設計引物。以前列腺癌LNCaP細胞基因組DNA作為模板，采用PCR技術擴增TFDP3片段，長約1244bp。RT-PCR，原位雜交雜交和免疫組化結果表明，TFDP3在前列腺癌細胞和組織中均有不同程度的表達。
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5、.通過轉染pcDNA3.1-TFDP3和PCMV-E2F1-HA于LNCaP細胞后，RT-PCR和Western blot檢測結果均顯示，TFDP3高表達的LNCaP細胞中自噬相關基因LC3B表達水平明顯升高；而轉染PCMV-E2F1-HA后LNCaP細胞中LC3B水平明顯降低(P<0.05)。表明轉錄因子TFDP3過表達可以誘導LNCaP細胞的自噬現(xiàn)象，同時提示E2F1和TFDP3的相互作用可以抑制LNCaP細胞的自噬功能。
　

6、　3.通過流式細胞儀檢測TFDP3與E2F1相互作用后前列腺癌細胞凋亡的變化，可以發(fā)現(xiàn)：PCMV-E2F1-HA重組質粒轉染后細胞凋亡率明顯上升（P<0.05)，而與pcDNA3.1-TFDP3共轉染后細胞凋亡率明顯下降（P<0.05）。證實TFDP3可以抑制E2F1誘導的細胞凋亡。
　　以上研究我們可以得到如下結論，TFDP3可以誘導 LNCaP細胞中自噬基因LC3B的表達，同時抑制E2F1誘導的細胞凋亡，提示TFDP3誘導的自