卡維地洛對(duì)家兔動(dòng)脈粥樣硬化模型中熱休克蛋白60及斑塊穩(wěn)定性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：熱休克蛋白(heatshockproteins，HSPs)是生物體對(duì)外界刺激發(fā)生反應(yīng)而產(chǎn)生的應(yīng)激蛋白，在應(yīng)激情況下起到細(xì)胞保護(hù)作用，包括HSP60家族等。雖然HSP60與AS發(fā)病已有大量研究資料支持，但是多集中于AS早期發(fā)病和中期進(jìn)展，與最終AS出現(xiàn)不穩(wěn)定性斑塊這方面的研究較少。而斑塊的不穩(wěn)定狀態(tài)正是臨床上有癥狀的心血管事件的病理基礎(chǔ)。因此，HSP60在AS斑塊不穩(wěn)定發(fā)生中的作用值得深究?？ňS地洛(carvedilol)是非選擇性

2、β受體阻滯劑，它的強(qiáng)大抗氧化作用在AS中的治療潛力越來越受到重視。目前，國(guó)內(nèi)外尚無卡維地洛對(duì)HSP60及斑塊穩(wěn)定性影響的相關(guān)研究。本實(shí)驗(yàn)研究目的是了解局部HSP60、血清可溶性HSP60是否與AS發(fā)展最終階段出現(xiàn)不穩(wěn)定斑塊有關(guān)，HSP60與斑塊穩(wěn)定性有關(guān)的可能機(jī)制；卡維地洛能否通過其抗氧化應(yīng)激作用影響HSP60在斑塊處的表達(dá)，影響HSP60釋放入血，從而影響下游炎癥反應(yīng)過程。 方法：采用家兔喂與高脂飼料4周后造成高脂血癥，在此基

3、礎(chǔ)上加以髂動(dòng)脈球囊剝脫術(shù)，建立兔動(dòng)脈粥樣硬化狹窄模型。隨機(jī)分為高脂對(duì)照組和卡維地洛給藥組，再喂養(yǎng)6周，處死動(dòng)物后獲取動(dòng)脈標(biāo)本，觀察血管局部AS斑塊病變形成情況，行大體觀察和病理切片鏡下觀察，分別測(cè)量其血管面積和斑塊面積、脂質(zhì)壞死核面積，并對(duì)斑塊局部HSP60、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrixmetalloprotease-2，MMP-2)表達(dá)分布情況行免疫組化染色觀察。在應(yīng)用卡維地洛藥物前后，留取血清標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試驗(yàn)(en

4、zymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)測(cè)定血清可溶性HSP60(serum-solubleHSP60，sHSP60)、白介素-18(imerleukin-18，IL-18)、白介素-6(IL-6)、ox-LDL，酶法測(cè)定丙二醛(malondialdehyde，MDA)，超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)，血清乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase，LDH)。觀察

5、脂質(zhì)過氧化程度及機(jī)體抗氧化能力的改變，進(jìn)行組內(nèi)用藥前后對(duì)比及組間對(duì)比分析，并計(jì)算各考察因素之間的相關(guān)關(guān)系。 結(jié)果： 1.高脂喂養(yǎng)和髂動(dòng)脈球囊內(nèi)膜損傷后，兔髂動(dòng)脈處出現(xiàn)明顯動(dòng)脈粥樣硬化，管腔呈偏心性狹窄，內(nèi)膜下有大量泡沫細(xì)胞，內(nèi)彈力膜拉伸，分離，斷裂，壞死脂質(zhì)核明顯?？ňS地洛用藥后，血管病變較高脂組減輕，多數(shù)未見明顯粥瘤及壞死物質(zhì)沉積，卡維地洛高劑量組在血管面積和斑塊面積上明顯低于高脂對(duì)照組(76299.00±29053.

6、36μm2vs181265.3±51605.97μm2，P=0.012；56277.9±31518.72μm2vs145364.1±44414.71μm2，P=0.013)，不穩(wěn)定高危性斑塊數(shù)目較高脂對(duì)照組有減少趨勢(shì)。 2.高脂對(duì)照組斑塊中HSP60、MMP-2表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性，分布于內(nèi)膜、內(nèi)膜下區(qū)域，纖維帽和脂核壞死核周圍組織亦有分布，延伸如壞死核下的中膜層，及AS斑塊的肩部。在卡維地洛用藥組中，表達(dá)量較少，多分布于增厚的內(nèi)膜中，

7、內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中較多，泡沫細(xì)胞中較少?？ňS地洛用藥組HSP60陽(yáng)性表達(dá)面積的表達(dá)量明顯低于高脂對(duì)照組(11493.67±2970.02μm2vs18530.23±2187.44μm2，P=0.005:13419.64±4700.10μm2vs18530.23±2187.44μm2，P=0.028)。MMP-2的表達(dá)量明顯低于高脂對(duì)照組(6604.13±1887.48μm2vs8141.57±1770.57.44μm2，P=0.00

8、2:7401.00±1815.42μm2vs8141.57±1770.57μm2，P=0.007)。HSP60的表達(dá)量和MMP-2的表達(dá)量之間存在明顯正相關(guān)關(guān)系(r=0.709，P=0.001)。 3.高脂對(duì)照組比空白對(duì)照組之間血清sHSP60、ox-LDL、MDA、IL-6水平顯著升高，卡維地洛用藥后，高劑量組均有明顯下降(106.30±28.45ng/mlvs140.58±25.56ng/ml，P=0.045；111.23±

9、25.18pg/mlvs132.73±29.11pg/ml，P=0.016；28.23±4.31nmol/mlvs12.77±2.74nmol/ml，P=0.000；17.08±3.02μg/mlvs20.93±1.87μg/ml，P=0.024)，IL-18水平各組間及組內(nèi)變化趨勢(shì)不明顯。sHSP60水平分別與ox-LDL、MDA、SOD、IL-6相關(guān)，其中與ox-LDL存在較強(qiáng)關(guān)系。 結(jié)論： 1.喂與高脂飲食，同時(shí)加

10、用髂動(dòng)脈球囊內(nèi)膜剝脫術(shù)損傷后可以成功建立兔的AS斑塊模型，在病理特點(diǎn)上與人類斑塊有可比性。 2.兔AS斑塊處有HSP60與MMP-2的表達(dá)，HSP60表達(dá)量和MMP-2表達(dá)量之間存在的明顯正相關(guān)關(guān)系說明HSP60對(duì)MMP-2的表達(dá)可能有上調(diào)作用，從而通過其影響斑塊穩(wěn)定性。 3.在兔外周血中有sHSP60存在，加于高脂血癥因素后有明顯升高。在高脂喂養(yǎng)后IL-6表達(dá)增加，同時(shí)并存sHSP60的升高，從兩者的相關(guān)關(guān)系可推測(cè)sH