姜黃素衍生物C086對(duì)腫瘤肝原位移植模型的抗腫瘤作用及其機(jī)理的研究.pdf

1、目的：建立肝癌皮下與肝原位移植瘤小鼠模型，研究姜黃素衍生物體內(nèi)外抗腫瘤作用及其機(jī)理，探討其與索拉菲尼聯(lián)合抗肝癌的作用。
　　方法：⑴四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法檢測姜黃素衍生物 C086及索拉菲尼對(duì) HepG-2細(xì)胞的增殖抑制作用，以及二者聯(lián)合抑制作用。⑵以KM小鼠H22肝癌細(xì)胞皮下移植瘤和肝癌原位移植瘤為模型，評(píng)價(jià)姜黃素衍生物體內(nèi)抗腫瘤生長活性。⑶以裸鼠人肝癌HepG-2細(xì)胞皮下移植瘤和肝癌原位移植瘤為模型，評(píng)價(jià)姜黃素衍生物體內(nèi)抗

2、腫瘤生長活性。⑷Western-blot方法檢測C086對(duì)HepG-2細(xì)胞RAS-RAF-MAPK增殖信號(hào)通路和Caspase家族凋亡信號(hào)通路的影響。⑸免疫組化及western-blot方法檢測C086對(duì)HepG-2裸鼠肝臟原位移植瘤中RAF-1、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK表達(dá)量的影響。
　　結(jié)果：①C086及索拉菲尼均呈濃度依賴性的抑制HepG-2細(xì)胞生長，C086作用細(xì)胞48小時(shí)IC50值為5.71±0.51μg·

3、mL-1，索拉菲尼為11.06±1.66μg·mL-1。二者聯(lián)用CI值小于1，有協(xié)同作用。②C086100mg/kg、150mg/kg每日一次尾靜脈給藥，200mg/kg每日一次灌胃給藥，對(duì)小鼠H22皮下瘤抑制率分別為36.2％、43.1%、61.4%，CTX組抑瘤率為79.7%。除CTX組體重下降外其余各組體重?zé)o明顯下降。C086200mg/kg每日一次灌胃給藥對(duì)小鼠H22肝原位移植瘤抑制率為78.4%，索拉菲尼單用抑瘤率為68.0%

4、，C086與索拉菲尼聯(lián)用抑制率無明顯提高。③C08650mg/kg、100mg/kg、200mg/kg每日一次灌胃給藥對(duì)裸鼠人肝癌HepG-2皮下移植瘤抑制率分別為23.9%、27.1%、33.9%，索拉菲尼50mg/kg灌胃給藥抑制率為74.1%。C086100mg/kg與索拉菲尼聯(lián)用抑瘤率達(dá)到84.3%。C08650mg/kg、100mg/kg、200mg/kg每日一次灌胃給藥對(duì)裸鼠人肝癌HepG-2肝原位移植瘤抑制率分別為33.0

5、%、49.7%、69.1%，索拉菲尼50mg/kg灌胃給藥抑制率為66.8%，C086100mg/kg與索拉菲尼聯(lián)用抑瘤率達(dá)到84.6%。各組實(shí)驗(yàn)結(jié)束前均無死亡，體重?zé)o明顯下降，各組差異小。④Western-blot結(jié)果顯示藥物處理的HepG-2細(xì)胞中p-ERK、p-MEK蛋白含量均減少并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。⑤免疫組化及 western-blot結(jié)果顯示在裸鼠人肝癌 HepG-2原位移植瘤中RAF-1、p-MEK、 p-ERK表達(dá)水平呈

6、劑量依賴性降低，聯(lián)合給藥組降低更明顯。
　　結(jié)論：⑴姜黃素衍生物 C086固體分散體灌胃給藥能夠較強(qiáng)的抑制小鼠 H22肝腹水瘤、人肝癌HepG-2移植瘤體內(nèi)生長。⑵姜黃素衍生物C086固體分散體在體內(nèi)外均能夠抑制肝癌 HepG-2增殖，該抑制作用可能與藥物阻斷RAS-RAF-MAPK增殖信號(hào)通路，激活caspase家族凋亡途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用有關(guān)。⑶姜黃素衍生物C086聯(lián)合sorafenib對(duì)肝癌HepG-2有協(xié)同作用，該協(xié)同作用