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1、目的:研究五眼果具有抗草酸鈣型尿石癥作用的活性部位及其作用機(jī)制。
方法:1、采用一維瓊脂凝膠雙向擴(kuò)散法,顯微鏡下觀察草酸鈣晶體晶型的變化,研究瓊脂膠、氯化鈣、草酸鈉等濃度及培養(yǎng)溫度、時(shí)間對(duì)草酸鈣型結(jié)石的體外凝膠模擬體系的影響,優(yōu)化出最佳的熱力學(xué)(過(guò)飽和度)和動(dòng)力學(xué)(成核、生長(zhǎng)、聚集)等因素的條件,建立一維瓊脂凝膠體外草酸鈣結(jié)石模擬模型。2、采用一維瓊脂凝膠體外草酸鈣結(jié)石模擬模型,在顯微鏡下觀察草酸鈣晶體晶型的變化,研究基質(zhì)pH
2、值以及藥物作用時(shí)間、藥物加入?yún)^(qū)段及五眼果不同提取部位等因素對(duì)草酸鈣結(jié)晶晶型的影響,篩選出五眼果具有抗草酸鈣結(jié)石的活性部位。3、分別以不同誘石劑(誘石劑1:0.75%乙二醇和0.75%氯化銨混合溶液、誘石劑2:1.0%乙二醇和1.0%氯化銨混合溶液)構(gòu)建小鼠腎草酸鈣結(jié)石模型,明確最佳誘石劑。4、采用誘石劑(0.75%乙二醇和0.75%氯化銨混合溶液)構(gòu)建小鼠腎草酸鈣結(jié)石模型,造模時(shí)長(zhǎng)4周,給予五眼果活性部位,通過(guò)測(cè)定尿草酸及Mg、Ca、P
3、、BuN、Cr含量以及末次收集尿液后取血,測(cè)血清 P、BuN、Cr含量;鏡下觀察腎小管中草酸鈣結(jié)晶分布和腎小管擴(kuò)張的情況,檢測(cè)各組小鼠腎組織病理學(xué)改變和草酸鈣結(jié)晶沉積情況;并采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)各組小鼠腎組織OPN蛋白的表達(dá)水平研究五眼果活性部位抗草酸鈣型尿石癥的作用及其作用機(jī)制。
結(jié)果:1.在1%瓊脂凝膠體系中,以[CaCl2]為0.1mol/L以及[Na2C2O4]為0.2mol/L,系統(tǒng)pH值為7.4,37℃下培養(yǎng)3天為
4、條件,可成功構(gòu)建以形成COM為主的一維瓊脂凝膠體外草酸鈣型結(jié)石模擬模型;藥物加于2區(qū)能更好地抑制 COM的形成。2.五眼果水部位在體外能夠抑制形成穩(wěn)態(tài)的COM,使系統(tǒng)生成亞穩(wěn)態(tài)的COD;而乙酸乙酯、正丁醇部位則無(wú)抑制作用,形成穩(wěn)態(tài)的COM。3.五眼果水部位能降低尿草酸、Ca、BUN濃度(P<0.05),對(duì)尿P、Mg、Cr則無(wú)影響;減少草酸鈣結(jié)晶在腎臟的沉積,抑制OPN的表達(dá)。
結(jié)論:成功構(gòu)建一維瓊脂凝膠體外草酸鈣結(jié)石模擬模型;
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