丙戊酸鈉對(duì)放射神經(jīng)損傷的保護(hù)機(jī)制研究及胃癌綜合治療循證探討.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一章 斑馬魚放射腦損傷模型的建立
　　目的:利用新型模式生物建立斑馬魚放射腦損傷模型，并探討其相關(guān)的放射損傷改變。
　　方法:3-6個(gè)月大小的160只成年斑馬魚隨機(jī)平均分配到2組，一組為正常對(duì)照組，一組為照射組，照射組給予單次劑量20Gy的頭部照射。利用Tune1染色觀察腦組織受照射后6h、24h和72h的凋亡情況;利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)斑馬魚腦組織P53、P21、BBC3等

2、基因在照射后6h、24h和72h表達(dá)變化;利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)斑馬魚腦組織中炎癥相關(guān)因子腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素1β（IL-1β）、環(huán)氧化酶-2（COX-2）和可誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶-2(INOS2)等在照射以后6h、12h、24h和72h的表達(dá)變化;利用蛋白免疫印跡的方法檢測(cè)P53蛋白在照射后72h的表達(dá)情況;利用商品試劑盒檢測(cè)氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)活性氧簇(ROS)、脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(S

3、OD)、谷胱甘肽(GSH)在照射后6h、12h、24h和72h的變化情況;利用開放場(chǎng)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)及探索功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，觀察斑馬魚照射一個(gè)月后的行為學(xué)改變。
　　結(jié)果:放射導(dǎo)致斑馬魚腦組織出現(xiàn)凋亡細(xì)胞增多，照射組的凋亡細(xì)胞在6h，24h，72h分別為(62.83±6.37)、(39.33±4.89)和(21.17±3.06)個(gè)/視野，正常組的凋亡細(xì)胞為(2.00±1.41)個(gè)/視野，凋亡細(xì)胞最高峰出現(xiàn)在照射后6h，與正常對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)意義（F=263.793，P＜0.001)。放射導(dǎo)致斑馬魚凋亡相關(guān)基因P53的表達(dá)增多(F=113.815，P＜0.001)、P21的表達(dá)也增多（F=128.551，P＜0.001）、BBC3的表達(dá)水平也增多（F=65.483，P＜0.001)，與正常對(duì)照組相比具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。放射導(dǎo)致斑馬魚促炎癥相關(guān)基因TNF-α的表達(dá)水平增多（F=25.575，P＜0.001)、IL-1β的表達(dá)水平也增多（F=12.012，P=0.002）、

5、COX-2的表達(dá)水平也增加（F=19.238，P=0.001）、INOS2的表達(dá)水平也增多（F=15.026，P=0.001），與正常對(duì)照組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。放射導(dǎo)致ROS的產(chǎn)生增多(F=11.067，P＜0.001)、并且脂質(zhì)過(guò)氧化物丙二醛MDA的水平也增加（F=104.578，P＜0.001)，同時(shí)降低了GSH的水平（F=651.864，P＜0.001)及SOD的活力（F=67.704，P＜0.001）。放射還導(dǎo)致斑馬魚在開放場(chǎng)

6、的檢測(cè)中出現(xiàn)游動(dòng)距離減少(正常組versurs照射組=(1865.99±389.22) cm versus(948.05±203.19)cm，t=6.611，P＜0.001）、游動(dòng)速度減少(正常組versurs照射組=(6.22±1.30) cm/s versus(3.17±0.67)cm/s,t=6.606,P＜0.001)、運(yùn)動(dòng)時(shí)間減少(正常組versurs照射組=(257.63±23.51)s versus(219.73±36.6

7、0)s，t=2.755，P=0.013）及探索能力的減弱(正常組versurs照射組=(5.84±1.59) min versus(15.15±4.41)min,t=-6.276,P＜0.001),與正常對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:利用成年斑馬魚可以成功復(fù)制放射腦損傷模型，其模型與其他動(dòng)物放射腦損傷模型有類似的發(fā)病機(jī)制。
　　第二章 丙戊酸鈉對(duì)腦及神經(jīng)放射損傷的保護(hù)機(jī)制研究
　　目的:放射誘導(dǎo)產(chǎn)生的活性氧簇(

8、ROS)對(duì)正常組織的損傷起著一個(gè)非常重要的作用。我們應(yīng)用斑馬魚的腦組織和耳蝸聽神經(jīng)細(xì)胞（HEI-0C1）研究丙戊酸鈉(VPA)在放射腦及神經(jīng)損傷中的作用。
　　方法:本研究應(yīng)用來(lái)干預(yù)放射誘導(dǎo)的斑馬魚損傷及耳蝸毛細(xì)胞損傷。觀察VPA處理對(duì)全身照射后斑馬魚的生存率的影響。采用了westernblot及RT-PCR檢測(cè)抗氧化通路Nrf2/HO-1的蛋白水平及基因水平的變化。利用開放場(chǎng)實(shí)驗(yàn)及探索功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了斑馬魚在照射后一個(gè)月的行為

9、學(xué)改變。毛細(xì)胞的活力在單獨(dú)應(yīng)用丙VPA或VPA聯(lián)合照射的情況下都進(jìn)行了檢測(cè)。利用RNA干擾處理了耳蝸毛細(xì)胞的Nrf2，研究其在缺失Nrf2基因的情況下的VPA的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述，完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的方差分析(One-Way ANOVA)用于比較多組樣本均數(shù)的比較，生存分析采用logRank檢驗(yàn)。P＜0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:VPA提高了全身致死劑量照射的斑馬魚的存活率(300mg/kg VPA其存活

10、率為76.67％，100mg/kg VPA其存活率為56.7％)，與照射組相比具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（log rank test x2=70.371 P＜0.001)。在斑馬魚腦組織中，VPA干預(yù)減少了放射誘導(dǎo)的ROS（F=421.159，P＜0.001）和MDA（F=1797.790，P＜0.001）的產(chǎn)生，提高了GSH的水平（F=18667.751，P＜0.001)及SOD的活力（F=2514.697，P＜0.001)，與照射組相比具

11、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。VPA治療激活了Nrf2/H0-1通路，增加了Nrf2蛋白的核內(nèi)轉(zhuǎn)移及提高了HO-1的基因（F=2187.762，P＜0.001）和蛋白水平，對(duì)放射誘導(dǎo)的正常組織損傷起到保護(hù)作用。在缺失Nrf2基因的耳蝸毛細(xì)胞中，VPA不能起到放射損傷的保護(hù)作用(應(yīng)用VPA與不應(yīng)用VPA其細(xì)胞活力:(40.09±1.76)％ versus(41.14±1.09)％，t=-0.877，P=0.430））。VPA還提高了斑馬魚放射腦損傷之后的

12、游動(dòng)距離(正常組、照射組與VPA治療組:(2058.08±551.05) cm versus(973.33±216.70)cm versus(1463.80±201.80) cm,F=23.171，P＜0.001）、游動(dòng)速度(6.86±1.84) cm/s versus(3.24±0.72) cm/sversus(4.88±0.67)cm/s，F(xiàn)=23.171，P＜0.001)）、提高了探索能力(5.74±1.42)min versus

13、(16.39±4.03)min versus(7.18±1.79)min,F=16.453，P＜0.001)。
　　結(jié)論:VPA對(duì)腦及神經(jīng)的放射損傷起到保護(hù)作用，主要是通過(guò)激活Nrf2/H0-1通路起作用的。
　　第三章 胃癌術(shù)中放療的療效分析
　　目的:本研究主要是統(tǒng)計(jì)比較胃癌術(shù)中進(jìn)行放療（實(shí)驗(yàn)組）與未進(jìn)行放療（對(duì)照組）的療效分析。
　　方法:通過(guò)檢索Pubmed，EMBASE和cochranelibrary數(shù)

14、據(jù)庫(kù)，納入關(guān)于術(shù)中放療與術(shù)中未進(jìn)行放療的對(duì)胃癌的治療的效果進(jìn)行比較的文獻(xiàn)，主要研究胃癌的總生存率(OS)和局部控制率在實(shí)驗(yàn)組中與對(duì)照組中的療效。檢索的文獻(xiàn)為的2014年7月以前的發(fā)表文獻(xiàn)。發(fā)表偏倚用倒漏斗圖進(jìn)行評(píng)估。
　　結(jié)果:在各個(gè)分期的胃癌中，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在總生存率上比較未具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Hazard ratio(HR)=0.84，95％ confidence interval(CI)=0.67-1.05，P=0.12

15、），實(shí)驗(yàn)組有利于提高總生存的趨勢(shì)。在局部晚期的胃癌（III期）以上，實(shí)驗(yàn)組顯著提高了患者的總生存（HR=0.60，95％ CI=0.40-0.89，P=0.01）。實(shí)驗(yàn)組還提高了局部控制率(HR=0.40,95％ CI=0.26-0.61, P＜0.001)。
　　結(jié)論:研究表明術(shù)中放療（實(shí)驗(yàn)組）可以提高局部晚期的胃癌（Ⅲ期或以上）的總生存，并且提高了胃癌的局部控制率，與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)中放療的優(yōu)點(diǎn)仍需要大規(guī)模的臨床隨

16、機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)來(lái)研究，從而提高胃癌綜合治療的療效。
　　第四章 機(jī)器人與開放胃切除術(shù)對(duì)胃癌治療療效的比較
　　目的:評(píng)估機(jī)器人胃切除與開放胃切除治療胃癌的有效性及安全性。
　　方法:全面搜索了PubMed、EMBASE、Cochrane Library及Web of Knowledge等數(shù)據(jù)庫(kù)。對(duì)比較胃癌治療中機(jī)器人胃切除術(shù)及開放胃切除術(shù)的研究進(jìn)行了評(píng)價(jià)，同時(shí)使用術(shù)中及術(shù)后的結(jié)果來(lái)評(píng)估手術(shù)的安全性及有效性，根據(jù)資料的異質(zhì)性

17、選用固定或隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:納入了4項(xiàng)包含5780例胃癌病人的研究，其中520例(9.00％)采用機(jī)器人胃切除術(shù)，5260例(91％)采用開放胃切除術(shù)，相比開放胃切除術(shù)，機(jī)器人胃切除術(shù)的手術(shù)時(shí)間更長(zhǎng)(加權(quán)均數(shù)差(WMD)=92.37，95％可信區(qū)間(CI):55.63-129.12，P＜0.00001)、失血量更少(WMD):-126.08，95％ CI:-189.02--63.13， P＜0.0001），住院時(shí)間