利用多種途徑進(jìn)行海南龍血樹種質(zhì)創(chuàng)新.pdf

1、本試驗(yàn)以龍血樹幼嫩莖段為材料，通過對(duì)龍血樹幼嫩莖段兩步培養(yǎng)法再生的研究，建立了龍血樹幼嫩莖段離體再生體系，證明了愈傷組織的發(fā)生和激素種類與濃度的關(guān)系；并在此基礎(chǔ)上研究了愈傷組織再生對(duì)不同人工誘變方法(60Co輻射、EMS、秋水仙素)的反應(yīng)、被處理愈傷組織再生能力和再生植株性狀多樣性、以及再生植株不同生理角度(外觀性狀、細(xì)胞學(xué))的變異性，得到了2株變異株系。并從龍血樹商業(yè)種植苗圃里選擇出11種變異類型。 (1)首次對(duì)海南龍血樹進(jìn)行

2、了種質(zhì)創(chuàng)新途徑的研究，田間自然變異的選擇是目前最為有效的途徑，組織培養(yǎng)分別培結(jié)合EMS、60Co輻射和秋水仙的誘變途徑也是有效果的。田間實(shí)生群體自然變異可高達(dá)20％，已發(fā)現(xiàn)有11中種變異類型，其中LXZ09類型的變異率高達(dá)8％。EMS誘變途徑中，濃度為2.0％的獲得最高的微核率(15.6‰)，EMS濃度為2.0％處理時(shí)間為4h的組合使材料達(dá)到半致死；細(xì)胞學(xué)的觀察看到了單微核、雙微核、三微核、染色體橋、滯留染色體和合胞體等染色體畸變現(xiàn)象，

3、再生苗中發(fā)現(xiàn)了1棵變異株。60Co輻射的誘變途徑中，20Gy的劑量使不定芽半致死，再生苗中發(fā)現(xiàn)了1棵變異株。秋水仙素誘導(dǎo)多倍體途徑中秋水仙素濃度0.5％，處理時(shí)間5d的處理組合能獲得較高的多倍率，多倍率為25％。 (2)首次獲得了海南龍血樹新種質(zhì)13份，并較為系統(tǒng)地對(duì)11份自然變異的種質(zhì)進(jìn)行了植物學(xué)性狀觀察，其中6份材料具有成為龍血樹新品種的潛力。這11份資源中，LXS01、LXS02、LXS03、LXS04、LXS06、LXS

4、07這幾份材料具有成為龍血樹新品種的潛力。 (3)首次鑒定了海南龍血樹的染色體數(shù)目，構(gòu)建了海南龍血樹根尖體細(xì)胞染色體制片技術(shù)。其技術(shù)要點(diǎn)是于上午9時(shí)～10時(shí)采集根尖，用飽和的對(duì)二氯苯預(yù)處理6h，固定4～18h，置于1mol/L稀鹽酸在60℃恒溫水浴酸化6min，置載玻片切片后用改良石炭酸品紅染色30min，敲片后顯微觀察。鑒定了海南龍血樹染色體數(shù)目(2n=42)。 (4)初步構(gòu)建了基于組織培養(yǎng)的海南龍血樹誘變復(fù)合技術(shù)體系

5、。再生體系技術(shù)要點(diǎn)是愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA6.0mg/L+NAA0.5mg/L，誘導(dǎo)率可達(dá)62％;增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L，經(jīng)4周培養(yǎng)，愈傷組織增殖率可達(dá)9.6；分化培養(yǎng)基為MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.1mg/L；生根培養(yǎng)基是MS+NAA0.3mg/L+AC1g/L，生根率為100％。再生體系結(jié)合EMS復(fù)合技術(shù)體系的要點(diǎn)是濃度為2.0％的EMS處理生長(zhǎng)旺盛的愈傷組織時(shí)間為4