新生重度HIBD大鼠心肌CT-1mRNA表達(dá)及其與心肌細(xì)胞凋亡的相關(guān)性.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)通過制備新生大鼠重度缺氧缺血性腦損傷(HIBD)合并心肌損傷的模型,留取心肌組織,檢測其中CT-1mRNA的表達(dá)和相關(guān)凋亡基因的水平變化,及其與心肌細(xì)胞凋亡率的關(guān)系,探討重度HIBD合并心肌損傷的發(fā)病機(jī)制,為臨床治療提供新的思路。
　　 方法:1.制備重度HIBD合并心肌損傷模型:新生7日齡wistar大鼠64只,隨機(jī)分為對照組8只,實(shí)驗(yàn)組56只。實(shí)驗(yàn)組雙側(cè)結(jié)扎并剪斷左頸總動(dòng)脈后,低氧處理2.5小時(shí),觀察缺氧時(shí)的行為

2、變化。依不同時(shí)間點(diǎn)處死,觀察結(jié)扎左側(cè)腦皮層大體病理變化并取腦切片行TTC染色觀察病理變化。觀察心臟大體病理變化并取心臟切片行HE染色觀察病理變化。
　　 2.取大鼠心肌組織,應(yīng)用westernblot法檢測心肌組織中CT-1mRNA及表達(dá)水平在缺氧后不同時(shí)間點(diǎn)的變化。
　　 3.取大鼠心肌組織,應(yīng)用PCR技術(shù)檢測心肌細(xì)胞中凋亡基因Bcl-2和bax、fas、Caspasse-3冰平在缺氧后不同時(shí)間點(diǎn)的變化。
　　

3、 4.取大鼠心肌組織,應(yīng)用TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)在缺氧后不同時(shí)間點(diǎn)的變化及其與CT-1、凋亡基因的相關(guān)性。
　　 結(jié)果:1.HIBD組與對照組的比較HIBD組大鼠置于缺氧環(huán)境后先是躁動(dòng)不安,然后不愛活動(dòng)、倦怠,并出現(xiàn)不同程度的缺氧癥狀,如皮膚發(fā)紺、呼吸急促,還出現(xiàn)抽搐、大小便失禁,走路不穩(wěn),向左側(cè)旋轉(zhuǎn)。HIBD組大鼠左側(cè)半球腦組織受損較嚴(yán)重,蒼白、水腫明顯,并可看到結(jié)扎側(cè)半球局部出現(xiàn)液化壞死灶,TTC染色可見右側(cè)半腦組

4、織呈深紅色,左側(cè)半腦組織呈蒼白色。HIBD組心肌收縮無力,心率快而不易數(shù)清,節(jié)律欠規(guī)整,心肌呈暗紅色。HE染色見心肌細(xì)胞腫脹,間質(zhì)水腫,肌間隙增寬,心肌細(xì)胞排列紊亂,可見肌絲斷裂,出現(xiàn)肌溶解。
　　 2.HIBD組與對照組相比,心肌細(xì)胞中CT-1mRNA水平及表達(dá)在缺血缺氧后2小時(shí)開始增加(P<0.05),至48小時(shí)達(dá)到高峰,顯著高于對照組(P<0.001),CT-1mRNA水平在72小時(shí)、5天開始下降,與對照組相比其差異無統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)意義(P>0.05),7天后低于對照組水平(P<0.01)。其表達(dá)在72小時(shí)開始下降,但仍然顯著高于對照組(P<0.001),5天、7天繼續(xù)降低,與對照組相比其差異已無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。二者成正相關(guān)(r=0.835,P<0.001)。
　　 3.HIBD組與對照組相比,促凋亡基因bax、fas、Caspase-3在缺血缺氧后2小時(shí)開始增加,bax,Caspase-3在48小時(shí)達(dá)到高峰,fas在72小時(shí)達(dá)到高峰,均顯著

6、高于對照組(P<0.001),bax,Caspase-3在72小時(shí)開始下降,但仍然顯著高于對照組(P<0.001),7天時(shí)與對照組相比其差異己無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。fas在5天、7天開始下降,但仍然顯著高于對照組(P<0.001)。抑凋亡基因Bcl-2在心肌細(xì)胞中的水平在缺血缺氧后2小時(shí)開始顯著降低(P<0.001),至48小時(shí)降至最低,均顯著低于對照組(P<0.001),72小時(shí)開始升高(P<0.001),5天、7天繼續(xù)升高,

7、但仍低于對照組(P<0.005)。Bcl-2/bax二者比值也有同樣的變化趨勢,只是7天與對照組相比其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。相關(guān)性分析結(jié)果顯示CT-1mRNA及表達(dá)與bax、fas、Caspase-3水平呈正相關(guān)(P<0.05):與bcl-2水平、bcl-2/bax比值呈負(fù)相關(guān)(P<0.001)。
　　 4.HIBD組與對照組相比心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)在缺血缺氧后2小時(shí)開始增加(P<0.01),72小時(shí)達(dá)到高峰,均顯著高于

8、對照組(P<0.001),5天、7天開始下降,仍顯著高于對照組(P<0.005)。相關(guān)分析結(jié)果心肌細(xì)胞AI與CT-1mRNA水平、CT-1mRNA表達(dá)、bax、fas、Caspase-3水平呈正相關(guān)(P<0.01)；與bcl-2水平、bcl-2/bax比值呈負(fù)相關(guān)(P<0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 1.通過觀察大鼠一般情況、行為能力、腦組織大體形態(tài)、TTC染色,證實(shí)成功制備了重度HIBD新生大鼠動(dòng)物模型。通過觀察新

9、生大鼠缺氧后表現(xiàn)、心臟大體形態(tài)、心肌細(xì)胞HE染色,證實(shí)該模型符合缺氧缺血性心肌損傷模型。
　　 2.重度HIBD大鼠心肌細(xì)胞CT-1mRNA及其表達(dá)在缺氧后迅速升高,說明CT-1參與了HIBD合并的心肌損傷的發(fā)病過程。提示CT-1可用于心肌細(xì)胞損害的診斷。
　　 3.重度HIBD大鼠心肌細(xì)胞促凋亡基因bax、fas、Caspase-3在缺氧后迅速升高,抑凋亡基因Bcl-2則呈下降趨勢,凋亡指數(shù)升高,說明重度HIBD大鼠心