喉鱗癌中FHIT基因純合性缺失、甲基化、表達(dá)及其微衛(wèi)星不穩(wěn)定性研究.pdf

1、為了深入探討FHIT基因與喉癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,該研究選取了41例喉鱗癌及其相對應(yīng)的喉正常粘膜,采用多種分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行研究,將為闡明喉鱗癌發(fā)生的分子機(jī)制及FHIT基因在喉鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的作用提供理論依據(jù).該研究分為以下兩部分:第一部分:喉鱗癌中FHIT基因純合性缺失、甲基化、表達(dá)及其臨床意義;方法:1.采用外顯子特異PCR(exon-specific PCR)擴(kuò)增方法,檢測41例喉鱗癌及其相對應(yīng)的喉正常粘膜中FHIT基因全部編碼外顯

2、子的純合性缺失.2.應(yīng)用PCR-based酶切甲基化技術(shù),研究了上述標(biāo)本中FHIT基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài).3.應(yīng)用免疫組化SP法,檢測上述標(biāo)本中FHIT蛋白和PCNA(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表達(dá).4.同時探討了上述改變與喉鱗癌臨床病理特征的關(guān)系.5.統(tǒng)計學(xué)分析:應(yīng)用SPSS 10.0版統(tǒng)計軟件包,采用x<'2>檢驗、Fisher精確概率法、t檢驗及方差分析對所有資料進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處

3、理.以P<0.05作為差異有顯著意義的檢驗標(biāo)準(zhǔn).第二部分:喉鱗癌中FHIT基因微衛(wèi)星不穩(wěn)定性和雜合性丟失的研究;方法:1.采用PCR-SSLP-銀染技術(shù)(PCR-simple sequence length polymorphism -silver staining)檢測41例喉鱗癌及其相對應(yīng)的喉正常粘膜中FHIT基因微衛(wèi)星位點的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性及雜合性丟失.2.同時探討了上述改變與喉鱗癌臨床病理特征的關(guān)系.3.統(tǒng)計學(xué)分析:應(yīng)用SPSS