苦參、百部生物堿的提取及活性研究.pdf

1、目的：從苦參、百部中提取生物堿，并優(yōu)化提取條件；應(yīng)用高速逆流色譜法對苦參、百部總生物堿進(jìn)行分離提純；檢測苦參生物堿的抗菌作用和體外抗氧化活性，為其產(chǎn)品的開發(fā)和應(yīng)用提供參考依據(jù)。 方法： 1．采用醇提法從苦參、百部中提取總生物堿，并用不同乙醇濃度對醇提法提取苦參生物堿的條件進(jìn)行優(yōu)化。 2．應(yīng)用HPLC測定優(yōu)化高速逆流色譜法的溶劑系統(tǒng)的分配系數(shù)，并探討流速、轉(zhuǎn)速對苦參、百部生物堿分離的影響。在此基礎(chǔ)進(jìn)行生物堿的制備，

2、并用紅外光譜對苦參峰進(jìn)行分析。 3．采用杯碟法和對倍稀釋法測定苦參生物堿對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、嗜水氣單胞菌、枯草桿菌對抑菌效果和最低抑菌濃度(MIC)。應(yīng)用掃描電鏡方法觀察苦參生物堿對大腸桿菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。 4．應(yīng)用苦參生物堿體外對羥自由基(OH-)和超氧陰離子(02-)的清除、抑制H2O2誘導(dǎo)小鼠紅細(xì)胞氧化溶血性等來研究苦參生物堿抗氧化活性。 結(jié)果： 1．苦參、百部的總生物堿得率分別為

3、15.2％和16.8％；苦參醇提法的優(yōu)化條件是：溫度為80℃，提取時間為4 h，提取次數(shù)3次，料液比為1:10，乙醇濃度為85％。 2．苦參、百部總生物堿的溶劑系統(tǒng)分別為氯仿-甲醇-pH5．4磷酸二氫鈉水溶液(4:3:2)、氯仿-甲醇-水(4:3.5:2)體系，流速2mL/min，轉(zhuǎn)速為650轉(zhuǎn)/min。苦參峰2紅外光譜分析具有典型生物堿圖譜特征。 3．20mg/mL苦參生物堿對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、嗜水氣單胞菌的抑

4、菌圈分別是18.8、12.6和6.4mm，MIC分別是5、8和20mg/mL，而對沙門氏菌、枯草桿菌無抑菌作用。掃描電鏡觀察，苦參醇提物使大腸桿菌的菌體形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯變化，表現(xiàn)為菌體固縮變形，中間凹陷，呈規(guī)則元寶狀，嚴(yán)重者細(xì)胞壁破損，內(nèi)容物外泄。 4．苦參生物堿對氧損傷的抑制作用均表現(xiàn)量效關(guān)系。在生物堿濃度為3.0mg/mL時，對超氧陰離子的清除率最高為53.7％；在生物堿濃度為5.0 mg/mL時，其對羥自由基清除率達(dá)42.