類風濕性關(guān)節(jié)炎的反義VEGF基因治療實驗研究.pdf

1、該文分四部分:第一部分VEGF大鼠類風濕性關(guān)節(jié)炎模型中的動態(tài)表達;目的:觀察大鼠類風濕性關(guān)節(jié)炎形成過程中滑膜組織VEGF動態(tài)表達.結(jié)論:1、采用型膠原皮下注射的方法可以成功誘導(dǎo)大鼠膠原性關(guān)節(jié)炎動物模型;2、VEGF在膠原性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程表達增強,它與大鼠關(guān)節(jié)腫脹和滑膜血管翳形成關(guān)系密切.第二部分反義VEGF165毒載體的制備;目的:1、構(gòu)建反義VEGF165粘粒載體并制備高滴度的反義VEGF165重組腺病毒;2、用同樣的方法制備高滴度

2、的空載體腺病毒及l(fā)acz報告基因腺病毒(pAxCAILacZ).結(jié)論:采用腺病毒DNA末端蛋白共轉(zhuǎn)染的方法可以獲得高滴度的反義VEGF165及l(fā)acz重組重組腺病毒.第三部分體外實驗:反義VEGF165基因轉(zhuǎn)染對體外培養(yǎng)的滑細胞分泌VEGF的影響;目的:1、評價腺病毒對體外培養(yǎng)的滑膜細胞的感染效率;2、觀察反義VEGF165腺病毒對滑膜細胞VEGF基因轉(zhuǎn)錄和翻譯的影響.結(jié)論:1、腺病毒載體可以高效轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的滑膜細胞.2、反義VEGF

3、165腺病毒感染滑膜細胞后不僅影響了滑膜細胞VEGF的基因轉(zhuǎn)錄過程,而且最終影響了蛋白質(zhì)的翻譯和表達過程.第四部分;動物實驗:反義VEGF基因轉(zhuǎn)染抑制大鼠膠原性關(guān)節(jié)炎形成的實驗觀察.目的:1、觀察lacz報告基因的重組病毒對滑膜組織的轉(zhuǎn)染能力及表達持續(xù)時間.2、觀察反義VEGF165基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染對大鼠類風濕關(guān)節(jié)炎形成的抑制作用.結(jié)論:1、腺病毒是一種可用于RA滑膜組織體內(nèi)基因方法比較理想的基因載體;2、腺病毒介導(dǎo)反義VEGF基因轉(zhuǎn)染可以