苦參堿立方液晶納米粒的制備工藝及對增生性瘢痕抑制作用的初步研究.pdf

1、[目的]：
　　1.通過星點設(shè)計-效應(yīng)面優(yōu)化法優(yōu)化立方液晶納米粒的制備工藝，采用最佳工藝制得苦參堿立方液晶納米粒，并對其進(jìn)行方法學(xué)分析，穩(wěn)定性、體外釋放度、透皮實驗等一系列研究。
　　2.通過動物實驗為增生性瘢痕治療的藥物制劑的進(jìn)一步研究提供實驗依據(jù)。
　　[方法]：
　　1.立方液晶納米粒的制備工藝優(yōu)化:以植烷三醇(phytantriol，PYT)或單硬脂酸甘油酯(Glycerol monooleate，GMO

2、)為載體材料，洛泊沙姆F127為穩(wěn)定劑，通過超細(xì)勻漿機(jī)剪切和超聲細(xì)胞粉碎制備立方液晶納米粒。在進(jìn)行效應(yīng)面優(yōu)化試驗前先進(jìn)行單因素試驗，依據(jù)單因素試驗結(jié)果選取時間考察范圍為5min～15 min，頻率（超聲功率）為30％～90％。應(yīng)用Minitab16.0統(tǒng)計軟件分別采用正交設(shè)計和星點設(shè)計-效應(yīng)面優(yōu)化法優(yōu)化立方液晶納米粒的最佳制備工藝，以超聲時間(min)，頻率(％)為影響因素，溫度、粒徑和zeta電位絕對值為響應(yīng)值進(jìn)行優(yōu)化試驗，通過Min

3、tab16.0軟件探究時間和功率對制備的立方液晶的溫度、粒徑、zeta電位絕對值的影響，同時對各因素進(jìn)行多元線性回歸和二項模式擬合，優(yōu)選最佳制備工藝，從而對兩種優(yōu)化方法進(jìn)行比較與選擇。
　　2.苦參堿立方液晶納米粒及脂質(zhì)體的方法學(xué)分析:按照2010版藥典規(guī)定苦參堿色譜條件，色譜柱為Ultimate XB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm×5μm)，流動相為甲醇∶PBS(pH=6.8)∶三乙胺=50∶50∶0.1％;流速:1

4、.0 ml/min;柱溫:常溫;檢測器:SPD-20A UV/Vis;檢測波長:220 n m;進(jìn)樣容積10μl，保留時間約為16.3 min。分別測定各劑型的穩(wěn)定性、精密度、包封率、回收率，考察各劑型穩(wěn)定性的影響因素、體外釋放度、透皮效果。
　　3.建立瘢痕動物模型，皮膚給藥飼養(yǎng)一月后取材，制成病理切片，分別采用HE染色法、苦味酸天狼星紅染色法、Masson三色染色法、免疫組織化學(xué)染色法進(jìn)行染色，熒光顯微鏡下分析瘢痕組織成分，比

5、較各劑型對瘢痕形成的影響。
　　[結(jié)果]：
　　1.立方液晶納米粒的最佳制備工藝
　　通過Minitab16.0軟件包的處理分析，正交設(shè)計的原始實驗和驗證試驗結(jié)果的重復(fù)性較低，實驗結(jié)果不好;而星點設(shè)計驗證實驗的結(jié)果和優(yōu)化實驗的預(yù)測值相差不大，優(yōu)化實驗的結(jié)果較好，得到的最佳工藝參數(shù)為:時間為6 min，頻率為50％。
　　2.苦參堿立方液晶納米粒及脂質(zhì)體的方法學(xué)分析
　　(1)苦參堿對照品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y

6、=58.706x+165.41(r2=0.999)，結(jié)果表明，苦參堿濃度在5.5625μg·m1-1～178μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
　　(2)實驗測得苦參堿立方液晶納米粒日內(nèi)精密度和日間精密度的RSD值均低于1.0％，加樣回收率分別為102.1％±1.9％、102.6％±1.9％和100.5％±2.1％，包封率為68％±2％，高于苦參堿脂質(zhì)體。
　　(3)制備方法專屬性較好，輔料不會對苦參堿含量測定產(chǎn)生影響。制劑

7、質(zhì)量穩(wěn)定，配方和工藝合理。
　　(4)苦參堿立方液晶納米粒24 h累積滲透量和滲透速率均優(yōu)于苦參堿脂質(zhì)體和水溶液，其中苦參堿立方液晶納米粒穩(wěn)態(tài)滲透速率分別是脂質(zhì)體的3.26倍和水溶液的1.87倍。
　　3.瘢痕模型試驗結(jié)果
　　與空白對照組比較，苦參堿可以促進(jìn)創(chuàng)傷的愈合，空白輔料對創(chuàng)傷的愈合沒有影響。在鏡下觀察瘢痕染色的切片得出，苦參堿抑制增生性瘢痕形成的效果很好，而且苦參堿立方液晶納米粒的作用效果最顯著。
　　

8、[結(jié)論]：
　　通過星點設(shè)計-效應(yīng)面優(yōu)化法獲取立方液晶納米粒的最佳制備工藝，制備出苦參堿立方液晶納米粒;按優(yōu)化后的處方及工藝進(jìn)行制備苦參堿立方液晶納米粒，并對立方液晶納米粒進(jìn)行穩(wěn)定性考察，考察的結(jié)果良好，說明制劑質(zhì)量穩(wěn)定，配方和工藝合理。本實驗選擇的制備方法既簡單又合理，取得了理想的效果。本實驗中苦參堿立方液晶納米粒的透皮效果最好，脂質(zhì)體的透皮效果較苦參堿水溶液透皮效果要低，原因可能是脂質(zhì)體的膜材料性質(zhì)以及磷脂類脂質(zhì)性質(zhì)不穩(wěn)定，儲