p16基因上游序列與胃癌細(xì)胞核基質(zhì)的相關(guān)性.pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文p16基因上游序列與胃癌細(xì)胞核基質(zhì)的相關(guān)性姓名：李卓申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：組織學(xué)與胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：張欽憲20020101鄭卅1人學(xué)2002屆研究生畢業(yè)論文p16摹閔上游序列與胃癌細(xì)胞核基質(zhì)的相關(guān)忡工，并與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。核基質(zhì)蛋白與腫瘤相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的相關(guān)性分析是目前腫瘤研究的新領(lǐng)域。以往對p16基因的研究多集中在結(jié)構(gòu)基因的改變和表達(dá)異常方面，核基質(zhì)的異常與p16基因，尤其是與p16基因上游序列調(diào)控作用的相關(guān)性

2、分析目前尚報道甚少。本研究采用十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS—PAGE)探討核基質(zhì)蛋白在胃癌中的改變；采用Southwesternblot技術(shù)探討p16基因上游序列一869bp中是否含有基質(zhì)相關(guān)區(qū)域(matrixattachedregions，MARs)，以及p16基因上游序列與胃癌細(xì)胞核基質(zhì)的相關(guān)性。方法：p16promoter—luc—pGL2一Basic報告基因表達(dá)質(zhì)粒上用EcoRI和HindlII雙酶切，提取890b

3、p片段(包含p16基因外顯子1Q上游一869bp片段)，采用地高辛隨機(jī)引物法標(biāo)記探針，應(yīng)用DNA斑點雜交法檢測探針的靈敏度。22例新鮮胃癌手術(shù)標(biāo)本，含相應(yīng)的癌組織、癌旁組織及正常組織。其巾高中分化10例，低分化12例；I—II期9例，Ill—IV期13例。經(jīng)蔗糖梯度離心得到細(xì)胞核后，低鹽、高鹽緩沖液提取得到核基質(zhì)，并收集提取過程中溶解的可溶性蛋白質(zhì)。核基質(zhì)分成2份，l份經(jīng)SDS—PAGE分析胃癌細(xì)胞核基質(zhì)，另1份經(jīng)SDS—PAGE后，’