糖尿病小鼠腎組織Periostin的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、目的:糖尿病腎病(DiabeticNephropathy,DN)是糖尿病最常見最嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一。糖尿病患者并發(fā)DN的死亡率是未并發(fā)者的30倍。由于早期癥狀不明顯，未予重視或發(fā)現(xiàn)，相當(dāng)多的DN患者在有明顯蛋白尿或合并明顯浮腫時(shí)才被覺察，而臨床對(duì)于DN缺乏有效方法控制其發(fā)展。因此，提高對(duì)DN早期病變的認(rèn)識(shí)并盡早采取有效措施，防止腎臟嚴(yán)重并發(fā)癥至關(guān)重要。Periostin原名成骨細(xì)胞特異性因子2(osteoblast-specific

2、factor2，OSF-2)，為成骨細(xì)胞及其前體細(xì)胞分泌產(chǎn)生的一種細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，特異表達(dá)于骨膜和牙周膜組織中。近年研究發(fā)現(xiàn)，periostin在腫瘤侵襲、骨折愈合、心肌重構(gòu)、瘢痕修復(fù)等方面有重要作用。DN的病理特征是腎小球細(xì)胞外基質(zhì)積聚導(dǎo)致的腎小球硬化，由此推測(cè)periostin作為一種重要的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白可能參與DN的發(fā)生、發(fā)展。本研究擬從組織及細(xì)胞兩方面，應(yīng)用生化指標(biāo)檢測(cè)、HE及Masson特殊染色法、免疫組織化學(xué)染色法，對(duì)比pe

3、riostin在正常腎組織及糖尿病腎組織中的表達(dá)，揭示periostin參與DN發(fā)生、發(fā)展的作用機(jī)制，并通過蛋白質(zhì)免疫印跡(WesternBlot)法從蛋白質(zhì)水平探討periostin在糖尿病小鼠腎組織中的表達(dá)及轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforminggrowthfactor-β，TGF-β1)與periostin表達(dá)的關(guān)系，為臨床早期發(fā)現(xiàn)、早期治療DN提供理論依據(jù)。
　　 方法:左側(cè)腎切除+腹腔STZ注射法建立CD-1小鼠

4、糖尿病模型，檢測(cè)血肌酐(serumcreatinine，Scr)及24小時(shí)尿蛋白定量，取正常小鼠及DN小鼠腎組織，制作石蠟切片，分別用蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)及Masson特殊染色法，光鏡觀察腎組織的病理變化;另外采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)腎組織periostin的表達(dá)，結(jié)果通過圖像分析系統(tǒng)(Image-ProPlus，IPP)進(jìn)行半定量分析。體外培養(yǎng)小鼠腎小球系膜細(xì)胞(NC組)，并給予高糖(HG組)及T

5、GF-β1（T組）刺激，對(duì)高糖刺激小鼠系膜細(xì)胞進(jìn)行TGF-β1中和抗體干預(yù)(AT組)，分別收集干預(yù)4小時(shí)和12小時(shí)各組的系膜細(xì)胞，并提取細(xì)胞蛋白，采用WesternBlot檢測(cè)各組periostin的表達(dá)，結(jié)果通過ImageJ圖像分析系統(tǒng)分析各組條帶的積分光密度（Integratedoptiondensity，IOD）值，并以β-actin的IOD值作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，各組蛋白的IOD值與其相比，對(duì)比值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。得出數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差

6、（(x)±S）表示，Levene法檢驗(yàn)方差齊性，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，分析應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理，以P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:糖尿病組小鼠的24小時(shí)尿蛋白、Scr較正常對(duì)照組明顯升高(P＜0.05);光鏡觀察兩組腎組織的HE、Masson染色表明，糖尿病組腎組織有明顯病變;腎臟免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示糖尿病組腎組織的periostin表達(dá)水平明顯提高(P＜0