db-db自發(fā)性糖尿病小鼠頜下腺PCNA、EGFR、p53表達及細胞凋亡的研究.pdf

1、目的：應用光鏡、免疫組織化學技術(shù)及原位末端標記法觀察db/db糖尿病小鼠頜下腺的病理形態(tài)學改變，表皮生長因子受體(Epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)、增殖細胞核抗原(Proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)、p53基因，在糖尿病小鼠頜下腺中的表達以及凋亡細胞陽性率的變化，了解糖尿病時小鼠頜下腺的變化，為糖尿病臨床治療及基礎研究提供實驗依據(jù)。 方法：引進日本C5

2、7BL/ksi-db/+m表型正常隱性基因小鼠，飼養(yǎng)于無菌包中，自由攝水、飲食，近親(兄妹)交配，其純合子后代，即為db/db(單基因遺傳自然發(fā)病型)糖尿病小鼠。自小鼠生后4周起，由尾靜脈取血檢測血糖，平均血糖值高達10mmol/L以上且同時伴發(fā)肥胖者確定為db/db糖尿病鼠，選取3、4、6、8、10月齡db/db糖尿病小鼠及相應月齡的db/+m正常小鼠作為對照組。4％多聚甲醛灌流固定，取頜下腺，4％多聚甲醛后固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切

3、片，HE染色。應用SP免疫組織化學方法對EGFR、.PCNA、p53三種相應抗原進行標記，應用TUNEL方法對凋亡細胞進行標記，計算機系統(tǒng)進行圖象分析，統(tǒng)計EGFR、PCNA、p53在頜下腺組織內(nèi)表達的細胞陽性率以及腺體內(nèi)凋亡細胞的陽性率。同時，光鏡下觀察三種抗原及凋亡細胞在頜下腺各部位的表達和分布情況。數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學處理采用析因?qū)嶒炘O計方差分析。當因素間有交互作用時，分析主因素的作用采用Duncan極差檢驗，進行兩兩比較，因素間無交互作

4、用時，采用q檢驗做兩兩均數(shù)的比較。 結(jié)果：隨著糖尿病發(fā)展，頜下腺組織萎縮，腺泡細胞縮小，排列不整齊，形態(tài)不規(guī)則。頜下腺間質(zhì)增生，可見纖維增多。免疫組織化學顯示，PCNA、EGFR、p53及凋亡細胞在對照組及糖尿病組頜下腺中均有表達或分布。在db/db糖尿病小鼠頜下腺PCNA細胞陽性率隨病程延長呈下降趨勢，且明顯低于對照組；EGFR、p53細胞陽性率均呈增高趨勢，且顯著高于對照組；凋亡細胞陽性率隨病程延長呈增高趨勢，且與同齡對照組

5、相比明顯增高。 結(jié)論：db/db糖尿病可導致頜下腺組織萎縮及實質(zhì)細胞形態(tài)學改變。隨著病程延長，PCNA表達逐漸減少，EGFR、p53表達增多。PCNA逐漸減少，說明頜下腺的增殖活動隨病情發(fā)展逐漸減弱；EGFR表達增多，說明糖尿病時EGFR作為多效應受體，可能被激活從而誘導了頜下腺的細胞凋亡；p53表達的上升，提示隨著糖尿病發(fā)展，頜下腺實質(zhì)細胞有凋亡趨勢。凋亡細胞陽性率隨糖尿病病程延長而增加顯著，這與p53表達的增強相一致，可能是