離子交換法純化重組類人膠原蛋白Ⅱ的研究.pdf

1、本文利用成本相對低廉的離子交換方法純化重組類人膠原蛋白Ⅱ(Human-likeCollagenBioproteinⅡ，HCBⅡ)，將菌體經(jīng)高壓勻漿、沉淀、超濾濃縮，得到HCBⅡ的粗品，然后通過離子交換法進(jìn)一步純化，獲得的HCBⅡ達(dá)到電泳純。通過對6種樹脂進(jìn)行靜態(tài)篩選，得出陽離子交換樹脂CM52對HCBⅡ的分離效果最佳。該樹脂對HCBⅡ有較高的吸附容量和選擇性：當(dāng)pH為4.0緩沖液不加NaCl時(shí)，其對HCBⅡ的吸附量為54.8mg/g濕樹

2、脂，分離因數(shù)2.64。 CM52樹脂對HCBⅡ的吸附平衡研究表明：HCBⅡ在CM52上的吸附基本符合Langmuir方程；pH、NaCl濃度對Langmuir方程參數(shù)影響較大；pH低于HCBⅡ等電點(diǎn)(pI=5.0)時(shí)，pH對吸附平衡的影響顯著：即在4＜pH＜5范圍內(nèi)，隨著pH增大，吸附容量減小，解離系數(shù)Kd增大；在3≤pH＜4范圍內(nèi)，隨著pH增大，吸附容量增大，解離系數(shù)Kd減小，而pH大于等于5.0時(shí)Langmuir方程參數(shù)變化

3、不明顯；隨著NaCl濃度增大，吸附容量減小，解離系數(shù)Kd增大；溫度對Langmuir方程參數(shù)的影響較小，溫度每升高10°C，吸附容量增加3％左右，解離系數(shù)Kd的變化不顯著。 以CM52對HCBⅡ的吸附平衡數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，優(yōu)化了CM52對HCBⅡ的純化工藝。通過實(shí)驗(yàn)，分別確定了靜態(tài)吸附和柱層析吸附的操作條件，即靜態(tài)吸附：在pH4.0、NaCl0.15mol.L、進(jìn)料濃度為7g/L，處理量為17.26mL/g的條件下吸附60min；柱層

4、析：在pH4.0、NaCl0.15mol/L、進(jìn)料濃度5g/L、流速5mL/min的條件下進(jìn)行吸附。然后上柱，在pH4.0、NaCl0.30mol/L下進(jìn)行脫附。實(shí)驗(yàn)表明：采用靜態(tài)吸附的方式吸附HCBⅡ，經(jīng)上柱洗脫后，HCBⅡ的吸附量可達(dá)到48.6mg/(g樹脂)，回收率83.8％，操作時(shí)間短，分辨率高，最終純化的HCBⅡ達(dá)電泳純，相對分子量為97kD。 對CM52吸附HCBⅡ的動力學(xué)研究表明：攪拌速度和料液濃度決定了其動力學(xué)控