青霉素誘導(dǎo)急性癇性大鼠海馬GABA-,A-Rα1亞單位的表達(dá)特征研究.pdf

1、背景和目的：癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)常見病之一，WHO(世界衛(wèi)生組織)2001年估計全世界癲癇的患病率為8‰。癲癇發(fā)作嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量，增加了醫(yī)療保健的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。癲癇的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，目前較一致的觀點是中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮與抑制的失平衡。以往簡單地認(rèn)為癲癇的發(fā)生是中樞內(nèi)Y-氨基丁酸能抑制作用減弱或缺乏的結(jié)果。然而目前研究發(fā)現(xiàn)在癲癇發(fā)病過程中以GABA為代表的抑制機(jī)制存在增強(qiáng)效應(yīng)。從宏觀角度，受“泄洪”現(xiàn)象的啟示，推測癇性發(fā)作過程可能存在“抑

2、制屏障突破機(jī)制”。GABA是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)最主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)；GABAAR是GABA發(fā)揮抑制功能最為重要的促離子型受體之一，αl亞單位為GABAAR上苯二氮卓(BZ)、巴比妥鹽(BB)和GABA結(jié)合位點，因此Q 1亞單位對GABA通過GABAAR所引起的抑制功能起著非常重要的作用。本研究通過觀察GABAAR α1亞單位在青霉素誘導(dǎo)急性癲癇大鼠海馬各時程和各區(qū)域表達(dá)的變化特征，初步探討“抑制屏障突破”假說及其分子機(jī)制。

3、材料與方法：將36只SD大鼠隨機(jī)分為六組，每組6只。各組處理如下： (1)正常組：即不用青霉素致癇，也不注射生理鹽水，麻醉后直接灌注處死； (2)生理鹽水對照組(NS對照組)：即不用青霉素致癇，僅在以下各組致癇灶相同位點注入等量生理鹽水： (3驚厥前期組：青霉素右側(cè)海馬微量注射致癇，腦電圖同步跟蹤記錄，當(dāng)腦電圖上顯示有癇性放電，但行為學(xué)無癇性發(fā)作時，此時視大鼠進(jìn)入驚厥前期，立即灌注處死； (4)驚厥期2小

4、時組：青霉素右側(cè)海馬微量注射致癇，當(dāng)出現(xiàn)行為學(xué)癇性發(fā)作癥狀并且Racine分級在2級及其以上時，此時視致癇鼠進(jìn)入驚厥期。在驚厥期2小時，立即灌注處死； (5)驚厥期6小時組：青霉素右側(cè)海馬微量注射致癇，當(dāng)出現(xiàn)行為學(xué)癇性發(fā)作癥狀并且Racine分級在2級及其以上時，此時視致癇鼠進(jìn)入驚厥期。在驚厥期6小時，立即灌注處死； (6)驚厥后期組：青霉素右側(cè)海馬微量注射致癇，出現(xiàn)行為學(xué)癇性發(fā)作癥狀并且Racine分級2級及其以上。當(dāng)

5、癇性發(fā)作終止時，視大鼠進(jìn)入驚厥后期。預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)致癇后24小時癲癇發(fā)作基本都停止了，故取致癇后24小時點為驚厥后期觀察點，此時灌注處死；分別在驚厥期0小時、1小時、2小時、6小時以及驚厥后期(致癇后24小時)對各組大鼠癇性發(fā)作進(jìn)行行為學(xué)Racine分級評估，同時記錄每5分鐘Racine 2級以上癇性發(fā)作的發(fā)作次數(shù)，算出每分鐘的發(fā)作次數(shù)即發(fā)作頻率，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。用單導(dǎo)聯(lián)記錄方式跟蹤記錄各組大鼠在驚厥前期、驚厥期2小時、驚厥期6小時以及驚厥

6、后期的腦電圖變化。在相應(yīng)時間點將實驗大鼠灌注處死，斷頭取腦，做連續(xù)冠狀石蠟切片，用免疫組化檢測各組大鼠海馬各區(qū)域(CA3、CA1、齒狀回)GABAAR α1亞單位的表達(dá)水平，所得相對灰度值(RGV)進(jìn)行單因素的方差分析。 結(jié)果： 1.青霉素海馬局部注射成功誘導(dǎo)了急性癇性發(fā)作模型，造模成功率87.5％ 2.行為學(xué)變化正常組、生理鹽水組無癇性發(fā)作。青霉素海馬局部注射約24.88±19.28分鐘后，出現(xiàn)2級及以上癇性發(fā)

7、作。發(fā)作強(qiáng)度：在驚厥期0小時以Racine 2～3級為主；驚厥期1～2小時逐步增強(qiáng)到Racine 4～5級；驚厥期6小時又恢復(fù)到Racine 2～3級；在驚厥后期(致癇后24小時)發(fā)作基本停止。發(fā)作頻率：在驚厥期1～2小時，有一個癇性發(fā)作頻率高峰；在驚厥期6小時逐漸減慢，在驚厥后期(致癇后24小時)幾乎無癇性發(fā)作。 3.腦電圖變化正常大鼠腦電波形頻率以α、β波為主，散在可見θ波，波幅小于75uv。生理鹽水組腦電圖與正常組無明顯差

8、異。青霉素右側(cè)海馬局部注射約14.17±5.92分鐘后腦電圖上逐漸出現(xiàn)多種形式的癲癇性放電波，主要是散在的陣發(fā)性的尖波、棘波。在驚厥期2小時點，腦電圖表現(xiàn)為中到高波幅的、持續(xù)性的尖波、棘波、尖慢波、棘慢波；在驚厥期6小時點，癇性波的頻率和幅度逐漸減弱；在驚厥后期(致癇后24小時)雖無行為學(xué)癇性發(fā)作，但腦電圖上仍可見低波幅的癇性放電。 4.免疫組化結(jié)果 4.1. 正常大鼠各區(qū)GABAAR α1亞單位的表達(dá)水平(以RGV表示

9、)分別是：CA3區(qū)111.28±6.04，CA1區(qū)104.80±2.93，齒狀回92.11±4.77，CA3>CA1>齒狀回，注射生理鹽水后表達(dá)無明顯改變。 4.2.右側(cè)海馬局部注射青霉素致癇后，GABAAR α1在CA3區(qū)的表達(dá)(以RGV表示)：在驚厥前期明顯增高；在驚厥期2小時又明顯下降；在驚厥期6小時、驚厥后期(致癇后24小時)又逐漸升高。 4.3.致癇后GABAAR α1在CA1區(qū)的表達(dá)(以RGV表示)：在驚厥前

10、期、驚厥期2小時與正常組比較無顯著性差異；在驚厥期6小時、驚厥后期逐漸升高。 4.4.致癇后GABAAR α1在齒狀回表達(dá)的變化：在驚厥前期、驚厥期2小時、6小時與正常組比較，都無顯著性改變；在驚厥后期(致癇后24小時)有顯著性升高。 結(jié)論： 1.青霉素海馬局部注射能成功誘導(dǎo)并建立急性癇性發(fā)作模型。 2.在青霉素誘導(dǎo)的急性癇性發(fā)作模型中，GABAAR α1亞單位在驚厥前期表達(dá)增加，驚厥期表達(dá)減弱以及驚厥后